大鼠局灶性腦缺血后神經(jīng)發(fā)生及其與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子關(guān)系的研究.pdf

1、腦缺血是嚴(yán)重影響人類(lèi)健康和生活質(zhì)量的腦血管疾病之一，目前尚不能有效地改善其長(zhǎng)期病理狀態(tài)，因此如何促進(jìn)腦缺血患者受損神經(jīng)功能的修復(fù)仍是目前研究的重點(diǎn)。研究表明，成年哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central ngrvous system，CNS)存在神經(jīng)發(fā)生(neurogenesis)，仍能不斷產(chǎn)生新的神經(jīng)元，此現(xiàn)象持續(xù)存在于側(cè)腦室室下區(qū)吻側(cè)(the rostral subventricular zone，SvZ)和海馬齒狀回(dentate

2、 gyrus，DG)的顆粒下區(qū)(me subgranular zone，SGZ)，這為腦缺血或神經(jīng)退行性病變后自體修復(fù)提供了依據(jù)。 由于神經(jīng)發(fā)生持續(xù)存在于成年哺乳動(dòng)物腦內(nèi)且可被生理和病理因素所調(diào)節(jié)，我們研究了成年大鼠局灶性腦缺血后SVZ和DG的細(xì)胞增殖與神經(jīng)發(fā)生隨時(shí)間的變化及其病理學(xué)意義，并探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelialcell growth factor，VEGF)及其受體與成年大鼠腦缺

3、血后神經(jīng)發(fā)生的關(guān)系。 方法： 通過(guò)大腦中動(dòng)脈阻斷法(middle cerebral artery occlusion，MCAO)建立大鼠右側(cè)短暫性局灶性腦缺血模型，選用成年雄性Wister大鼠共78只：采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為13組，每組6只，1組為正常對(duì)照組，缺血實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組分別按術(shù)后1、4、7、14、21、28d各時(shí)間點(diǎn)分為6組。用5-溴-2-脫氧尿核苷(5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU)標(biāo)

4、記新生神經(jīng)前體細(xì)胞；以大鼠神經(jīng)功能障礙的出現(xiàn)作為腦缺血的整體評(píng)價(jià)，四氮唑(TTC)染色判斷腦缺血的部位及范圍；為鑒定增殖的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的細(xì)胞類(lèi)型，將BrdU與神經(jīng)元特異性標(biāo)記 物TuJ1、MAP-2及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP免疫熒光雙標(biāo)記，用免疫組織化學(xué)方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞增殖及其分化情況，同時(shí)觀察新生神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體情況，分析腦缺血后的成年神經(jīng)發(fā)生及其調(diào)節(jié)因素。 結(jié)果： 1．大腦中動(dòng)脈阻斷法

5、局灶性腦缺血模型的建立： 實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物蘇醒后有對(duì)側(cè)偏癱即左側(cè)前肢不能伸展屈曲收于腹下并向左側(cè)轉(zhuǎn)圈表現(xiàn)為主；行TTC染色，可見(jiàn)MCA供血腦區(qū)即額頂葉背外側(cè)皮質(zhì)、尾殼核梗塞組織呈白色。 2．大鼠局灶性腦缺血后的神經(jīng)發(fā)生： (1)正常成年大鼠腦組織中，DG只存在少量BrdU陽(yáng)性細(xì)胞，大部分位于SGZ；SVZ的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較多，主要分布在側(cè)腦室側(cè)壁和背外側(cè)角處并沿胼胝體腹側(cè)明顯向外側(cè)遷移。 (2)局灶性腦缺

6、血后大鼠DG的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在SGZ。腦缺血后Id，缺血側(cè)SGZ的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞開(kāi)始增加(P<0.05)，7d后達(dá)到高峰，增加約6倍，28d后接近正常。而對(duì)側(cè)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞在腦缺血后4d開(kāi)始增加，7d達(dá)到高峰；并且可見(jiàn)缺血側(cè)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯多于對(duì)側(cè)(P<0.05)。 (3)局灶性腦缺血后4d，缺血側(cè)SVZ的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞明顯增加，14d時(shí)達(dá)到峰值，較對(duì)照組增加約6倍(P<0.05)；對(duì)側(cè)SVZ也有增加，且雙

7、側(cè)增加的新生細(xì)胞數(shù)基本相等。 (4)腦缺血后SGZ、SVZ的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表型鑒定：缺血側(cè)SGZ、SVZ的BrdU<'+>/TuJl<'+>、BrdU<'+>/MAP-2<'+>細(xì)胞數(shù)在腦缺血后14d開(kāi)始增加(P<0.05)，28d后達(dá)到高峰；BrdU<'+>/GFAP<'+>細(xì)胞數(shù)在腦缺血后無(wú)明顯變化。 3.腦缺血后BrdU<'+>/VEGF<'+>、BrdU<'+>/FLK-1<'+>細(xì)胞在細(xì)胞增殖腦區(qū)的表達(dá)：

8、 (1)與對(duì)照組相比，腦缺血后SGZ與SVZ的BrdU<'+>/VEGF<'+>細(xì)胞數(shù)在腦缺血后1d開(kāi)始增加，4d達(dá)到峰值；BrdU<'+>/FLK-1<'+>細(xì)胞數(shù)在腦缺血后4d開(kāi)始增加，7d達(dá)到峰值。 (2)在SVZ，BrdU<'+>/VEGF<'+>、BrdU<'+>/FLK-1<'+>細(xì)胞數(shù)在腦缺血后4d開(kāi)始增加，7d后達(dá)到高峰。 結(jié)論： (1)大鼠線栓法MCA0模型是研究局灶性腦缺血后自身修復(fù)和