抑制IKKβ表達(dá)對(duì)缺氧誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞炎癥介質(zhì)表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討以IKKβ作為治療靶點(diǎn)，研究IKKβ特異性siRNA干擾其表達(dá)對(duì)缺氧誘導(dǎo)的炎癥介質(zhì)表達(dá)的影響。
　　 方法：以氯化鈷(CoCl2)作為化學(xué)缺氧誘導(dǎo)劑，加入DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基模擬缺氧環(huán)境，將IKKβ特異性siRNA轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，用EMSA技術(shù)檢測(cè)NF-κB活性。分別采用qRT-PCR， Western blot, ELISA及流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后NRK52E細(xì)胞中IKKβ mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的變化、誘導(dǎo)缺氧后下游炎

2、癥因子白介素-18(IL-18)和中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)mRNA和蛋白表達(dá)的變化以及細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：熒光顯微鏡檢測(cè)siRNA的轉(zhuǎn)染效率達(dá)96.4％，NRK52E細(xì)胞在正常情況下可表達(dá)IKKβ。轉(zhuǎn)染siRNA后IKKβ在mRNA及蛋白水平的表達(dá)與未轉(zhuǎn)染相比顯著降低（P＜0.05），NF-1B活性與對(duì)照組相比顯著降低(P＜0.05)。腫瘤壞死因子(TNF-α)（10ng/ml）或CoCl2(100μ

3、mol/L)能促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞分泌IL-18和NGAL，并呈時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。預(yù)轉(zhuǎn)染siRNA的氯化鈷誘導(dǎo)組IL-18和NGAL的表達(dá)量較單純氯化鈷誘導(dǎo)組分別在mRNA水平及蛋白水平均有所減少，提示在NRK52E細(xì)胞中靶向IKKβ的siRNA可降低由氯化鈷誘導(dǎo)的IL-18和NGAL的表達(dá)，預(yù)轉(zhuǎn)染siRNA能夠減少了CoCl2誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。
　　 結(jié)論：TNF-α或CoCl2可誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)具有生物學(xué)活性的IL-18和