大黃素對(duì)IL-1β誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、目的：探討大黃素(EMD)對(duì)IL-1β誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(TEMT)的影響。 方法：體外復(fù)蘇培養(yǎng)正常大鼠腎小管上皮細(xì)胞株(NRK52E)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用胰酶消化、接種、同步化后分組處理：(1)對(duì)照組：僅加入含5％CS的DMEM培養(yǎng)基；(2)大黃素組：分別加入含不同濃度大黃素(12.5、25、50、100mg/L)的含5％CS的DMEM培養(yǎng)液；(3)IL-1β誘導(dǎo)組：加入含10μg/LIL-1β的含5％

2、CS的DMEM培養(yǎng)液；(4)IL-1β+大黃素組：同時(shí)加含IL-1β和大黃素的含5％CS的DMEM培養(yǎng)液，前者終濃度為10μg/L，后者終濃度分別為12.5、25、50、100mg/L。每組分別于培養(yǎng)至12、24、48及72h時(shí)，用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，用細(xì)胞免疫化學(xué)染色法檢測(cè)細(xì)胞α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)及角蛋白(CK)的表達(dá)。 結(jié)果：LIL-1β、大黃素及二者聯(lián)合對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響：正常NRK52E細(xì)胞呈卵圓形貼

3、壁生長(zhǎng)，72h時(shí)細(xì)胞形成融合的單層，呈典型的“鋪路石”樣改變。IL-1β誘導(dǎo)處理24h時(shí)部分細(xì)胞由卵圓形變?yōu)樗笮?，誘導(dǎo)48h時(shí)成梭形改變的細(xì)胞比例更大，72h時(shí)細(xì)胞雖鋪滿單層，但部分細(xì)胞拉長(zhǎng)，細(xì)胞間隙增大，喪失典型“鋪路石”樣改變。12.5及25mg/L大黃素分別作用不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)均無(wú)明顯影響；50、100mg/L大黃素分別作用24h后部分細(xì)胞開(kāi)始變圓縮小。IL-1β與大黃素聯(lián)合作用時(shí)，12.5mg/L大黃素在各時(shí)間點(diǎn)對(duì)IL-1β

4、誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)改變無(wú)明顯影響；25mg/L大黃素作用48h后可減輕IL-1β誘導(dǎo)的細(xì)胞梭形改變；50、100mg/L大黃素作用48h后也可減輕IL-1β誘導(dǎo)的細(xì)胞梭形改變，但同時(shí)部分細(xì)胞變圓縮小，變圓縮小的細(xì)胞數(shù)分別與同期50、100mg/L大黃素單獨(dú)作用時(shí)相近。2.IL-1β、大黃素及二者聯(lián)合對(duì)細(xì)胞α-SMA、CK表達(dá)的影響：細(xì)胞免疫染色顯示α-SMA及CK主要表達(dá)于胞漿，呈黃色或棕黃色。對(duì)照組細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)均高表達(dá)CK，少量α-SM

5、A的表達(dá)。IL-1β誘導(dǎo)12h時(shí)細(xì)胞α-SMA表達(dá)較對(duì)照組增加、CK表達(dá)較對(duì)照組減少；誘導(dǎo)24h時(shí)α-SMA表達(dá)更多，CK表達(dá)進(jìn)一步減少，這種改變?cè)?8h及72h時(shí)更明顯，呈時(shí)間依賴。不同濃度大黃素分別單獨(dú)作用不同的時(shí)間，對(duì)細(xì)胞α-SMA和CK的表達(dá)均無(wú)明顯影響，分別與同期對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性。12.5mg/L大黃素明顯下調(diào)IL-1β誘導(dǎo)的α-SMA表達(dá)、上調(diào)CK表達(dá)，呈時(shí)間依賴。25mg/L大黃素在各時(shí)間點(diǎn)下調(diào)α-SMA表達(dá)、上調(diào)C

6、K表達(dá)的作用分別較同期12.5mg/L大黃素的作用更明顯。50、100mg/L大黃素分別作用不同時(shí)間，對(duì)IL-1β誘導(dǎo)α-SMA表達(dá)的下調(diào)以及上調(diào)CK表達(dá)的作用分別與同期25mg/L大黃素的作用相比無(wú)顯著差異。 結(jié)論：10μg/LIL-1β可時(shí)間依賴性的誘導(dǎo)NRK52E細(xì)胞轉(zhuǎn)分化；大黃素對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的NRK52E細(xì)胞轉(zhuǎn)分化有明顯抑制作用，呈濃度、時(shí)間依賴。25mg/L大黃素作用48小時(shí)對(duì)IL-1β誘導(dǎo)NRK52E細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的