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文檔簡介
1、本實驗室前期工作中利用RNA干擾(RNAi)技術(shù),構(gòu)建FUT1/FUT4基因的干涉質(zhì)粒(FUT1/FUT4 siRNA),通過抑制FUT1/FUT4基因的表達,降低LeY寡糖抗原的合成,利用細胞培養(yǎng)和建立A431腫瘤細胞荷瘤小鼠模型,通過體內(nèi)、體外實驗,證明:通過注射FUT1/FUT4 siRNA可抑制腫瘤細胞的增殖。為進一步探討siRNA在腫瘤增殖中的分子作用機制,本論文研究LeY寡糖抗原與腫瘤血管新生的相關性。 血管內(nèi)皮生長
2、因子(VEGF)是促進實體瘤血管發(fā)生和血管新生的重要因子之一,而腫瘤組織的微血管密度(microvessel density,MVD)是反映實體瘤增殖能力的客觀指標。因此本實驗選用VEGF和MVD來評價腫瘤血管新生。 本研究采用荷瘤小鼠模型的腫瘤組織,通過RT-PCR、Western blot及間接免疫熒光檢測方法,檢測注射FUT1/FUT4 siRNA后對腫瘤組織中FUT1/FUT4基因和LeY寡糖抗原表達的情況;通過West
3、ern blot和免疫組織化學方法,檢測腫瘤組織中VEGF的表達;通過CD34免疫組化染色,觀察腫瘤組織中血管新生情況,分析腫瘤組織中MVD值的變化。實驗結(jié)果表明:重組FUT1/FUT4干涉質(zhì)??梢种颇[瘤組織中VEGF的表達,減少腫瘤血管新生,并且是通過降低腫瘤組織中特異的FUT1/FUT4的表達而下調(diào)LeY寡糖抗原的合成而發(fā)揮作用的。 通過對荷瘤小鼠模型中腫瘤組織的研究,重組FUT1/FUT4干涉質(zhì)??梢种颇[瘤組織的血管新生,
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