刺參酸性粘多糖對H22荷瘤小鼠腫瘤生長抑制作用及相關(guān)基因與蛋白表達的影響.pdf

1、目的:通過觀察刺參酸性粘多糖（Stichopus japonicas acidic mucopolysaccharide，SJAMP）對肝癌H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用，從細胞分子生物學角度探討其對H22肝癌細胞的增殖與凋亡作用，研究H22肝癌細胞增殖凋亡相關(guān)基因及蛋白的表達，為SJAMP的進一步開發(fā)利用提供科學依據(jù)。
　　方法:建立肝癌H22荷瘤小鼠模型，將50只昆明種小鼠隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，分別為陰性對照組（A

2、組，生理鹽水）、陽性對照組(B組，5-FU20mg/kg)、SJAMP低劑量組(C組，SJAMP6.25mg/kg)、 SJAMP中劑量組(D組，SJAMP12.5mg/kg)、SJAMP高劑量組（E組，SJAMP25mg/kg）。在建立肝癌模型的同時，各組均采用腹腔注射方式給藥，每日一次，連續(xù)給藥12天后處死。觀察小鼠腫瘤發(fā)生情況，分別應(yīng)用光學顯微鏡及電鏡觀察各實驗組小鼠的瘤組織及細胞的病理學變化，用免疫組織化學方法檢測H22腫瘤細胞

3、內(nèi)PCNA、P53、P21、C-myc、Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1、Bcl-2、Bax蛋白的表達，用實時定量PCR(Real-time PCR，RT-PCR)方法檢測H22腫瘤細胞中P53、P21、C-myc、Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1、Bcl-2、Bax mRNA的表達。
　　結(jié)果:荷瘤小鼠經(jīng)腹腔注射12天后，脫頸椎處死，無菌條件下剝?nèi)∧[瘤組織，發(fā)現(xiàn)實驗各組均有腫瘤組織出現(xiàn)，同陰性對照

4、組相比，其它四組瘤量均有所減輕，且B、E兩組瘤量與A組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);HE染色顯示SJAMP各劑量組腫瘤細胞排列疏松，細胞質(zhì)固縮，核質(zhì)比減小;透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SJAMP各劑量組腫瘤細胞均出現(xiàn)不同程度的凋亡形態(tài)學特征，如出現(xiàn)細胞固縮、細胞質(zhì)邊集、凋亡小體等;免疫組織化學檢測結(jié)果顯示，與A組相比，SJAMP各劑量組小鼠與細胞增殖凋亡相關(guān)蛋白PCNA、P53、C-myc、Cyclin D1、CDK4、E2F-1、Bcl

5、-2表達下降，且差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，P21、pRb、Bax蛋白的表達上升，且差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Real-time PCR結(jié)果顯示，與A組相比，SJAMP各劑量組小鼠與細胞增殖凋亡相關(guān)基因P53、C-myc、CyclinD1、CDK4、E2F-1、Bcl-2表達下降，且差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，P21、pRb、Bax蛋白的表達上升，且差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:SJAMP能夠抑

6、制肝癌H22荷瘤小鼠腫瘤的生長。SJAMP可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細胞內(nèi)增殖細胞核蛋白PCNA、增殖相關(guān)基因p53、p21、C-myc mRNA及蛋白的表達，并通過調(diào)節(jié)Rb-E2F通路中Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1 mRNA及蛋白的表達，作用于細胞周期，使小鼠H22肝癌細胞發(fā)生細胞周期阻滯，抑制腫瘤細胞增殖;SJAMP也可能能通過調(diào)節(jié)腫瘤細胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2mRNA及蛋白的表達，促進腫瘤細胞發(fā)生凋亡，從而達到