人IL-24對腫瘤細胞生長的抑制作用研究.pdf

1、白細胞介素(IL-24)又稱黑色素瘤分化相關(guān)基因-7(melanom.differentiationassociate.gene-7，MDA-7)，是一種細胞因子且屬于白介素-10家族。最初是在人黑色素瘤細胞中發(fā)現(xiàn)的，該基因在誘導分化的黑色素瘤細胞中高表達，并能促進黑色素瘤細胞分化。該基因主要表達于胸腺、脾、外周血單核細胞等免疫組織和分化的黑色素細胞，其他組織細胞可誘導表達。該基因具有抗腫瘤作用，已引起廣泛關(guān)注。
　　 為了研究

2、IL-24的功能，將該基因克隆到融合表達載體pET-28a(+)相應的酶切位點上，得到融合蛋白表達質(zhì)粒pET-28a-IL-24，經(jīng)PCR、酶切鑒定以及測序證明重組是正確的。將該重組子轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞E.col.BL21(DE3)，經(jīng)終濃度為1mM的IPTG誘導后，在28kDa處有一特異性蛋白條帶，與預期值相符。經(jīng)超聲波裂解菌體分離包涵體并離心、洗滌；對進行包涵體溶解后采用親和層析純化純化融合蛋白6xHis-IL-24。以該重組蛋白為抗原

3、免疫雄性新西蘭大白兔制備多克隆抗體，效價大于1：51200；Wester.blot實驗呈陽性，為進一步研究該蛋白的功能分析奠定了基礎。
　　 我們進一步構(gòu)建IL-24真核表達質(zhì)粒并研究其體外表達對腫瘤細胞的生長抑制作用。采用重組DNA技術(shù)構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pEGFP-IL24。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒及空載體外轉(zhuǎn)染腫瘤細胞和正常細胞，用MTT法檢測細胞的體外增殖活力；同時用激光共聚焦顯微鏡觀察其細胞核的變化。結(jié)果表明：pEGFP-