沙利度胺對大鼠TNBS結(jié)腸炎腸壁纖維化形成的影響及其機制研究.pdf

1、背景：炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease,IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(Crohn disease,CD),其病因目前認為是由多種因素(主要包括環(huán)境、遺傳、感染和免疫因素)相互作用引起的慢性炎癥反應(yīng)[1]所致。這種慢性炎癥反復發(fā)作過程導致黏膜不斷被破壞和修復,這一過程引起腸道間質(zhì)的成纖維細胞與肌成纖維細胞活化,進而產(chǎn)生大量的細胞外基質(zhì)(Extracellu

2、lar matrix,ECM),同時基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)/基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMPs)的動態(tài)平衡被打破使ECM降解失衡,兩方面因素導致ECM的過度沉積,最終發(fā)生腸壁纖維化[2]。研究認為TGF-β信號通路是IBD纖維化過程中重要機制。
　　現(xiàn)今IBD的主要治療藥物有氨基水楊酸制劑、糖皮質(zhì)激

3、素和免疫抑制劑,這些藥物主要是在炎癥活動期起到抗炎作用,但長期慢性炎癥導致的腸壁纖維化卻不可避免[3]。因此,對 IBD早期防治的研究應(yīng)著力于腸壁纖維化的形成機制,這將為IBD的治療和預(yù)防提供新的靶點。
　　沙利度胺是德國制藥商格蘭泰公司20世紀50年代推出的一種鎮(zhèn)靜劑,為谷氨酸衍生物,具有免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)作用。動物實驗中看到沙利度胺在多種器官纖維化如腹膜纖維化[4]、肺纖維化[5-8]、肝纖維化[9-12]及心肌梗死后的結(jié)構(gòu)重

4、塑[13]中起著抑制纖維化的作用,其作用機制主要是通過抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)的分泌,使TGF-β1表達水平下調(diào),其分泌水平的下調(diào)引起細胞外基質(zhì)沉積減少導致膠原合成減少,同時TGF-β1水平下調(diào)破壞了 MMPs/TIMPs之間的平衡來抑制 ECM沉積從而抑制纖維化形成。因此我們推測,在炎癥性腸病腸壁纖維化中,沙利度胺可能通過抑制TGF-β1的膠原合成及促進基質(zhì)沉積的

5、作用來抑制腸壁纖維化的形成,這為 IBD的臨床治療提供新的思路。
　　目的：探討沙利度胺能否抑制三硝基苯甲酸(trinitrotoluene,TNBS)結(jié)腸炎大鼠腸壁纖維化的發(fā)生及形成及其主要機制。
　　方法：將60只SD大鼠隨機分4組,每組15只:正常組、模型組、治療組及對照組。正常組給予生理鹽水灌腸后給予正常飲食飲水,不做特殊處理;模型組給予TNBS/乙醇混合液(混合液按100mg/kg計算的TNBS加上等體積的無水乙醇

6、)灌腸[14]后給予正常飲食飲水,不做特殊處理;治療組給予 TNBS灌腸后,將沙利度胺藥片碾碎溶于橄欖油(40mg/ml),每日早8點給予大鼠沙利度胺200mg/kg/d灌胃[15];對照組給予TNBS灌腸后第2天開始每日給予同治療組相同劑量的橄欖油灌胃。每日觀察并記錄所有大鼠的精神、活動及毛發(fā)狀態(tài),大便性狀及便血情況,體重下降情況,并行疾病活動指數(shù)評分(Disease activity index,DAI),28天后處死所有大鼠取各組

7、結(jié)腸組織,行大體形態(tài)損傷指數(shù)(colon macroscopic damage index,CMDI)評分,病理切片行HE染色及Masson染色觀察并評估結(jié)腸慢性炎癥及纖維化程度,取各組結(jié)腸組織勻漿行Elisa及western blot檢測各組結(jié)腸組織TGF-β1、I型及III型膠原、MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：經(jīng)過造模及藥物干預(yù),與正常組大鼠相比,模型組大鼠精神萎靡,出現(xiàn)稀糊狀及黏液膿血便,體

8、重明顯下降,DAI評分明顯升高,而治療組上述情況較模型組好轉(zhuǎn),DAI評分較模型組下降,差異有統(tǒng)計學意義,對照組情況與模型組無顯著差異。與正常組相比,模型組 CMDI評分明顯升高,病理切片 HE染色可見多量慢性炎癥細胞浸潤,Masson染色可見大量膠原沉積,而治療組上述指標改善,差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)腸組織均漿行Elisa檢測及western檢測可見,與正常組相比,模型組TIMP-1、TGF-β1、I型及III型膠原表達水平顯著升高(P<0