卡氏肺孢子蟲特異性DNA探針的制備及其實驗應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究采用醋酸潑尼松龍誘導建立卡氏肺孢子蟲肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)大鼠模型,獲得實驗所需的基本材料.以隨機引物法制備地高辛標記的非放射性探針,采用斑點雜交檢測大鼠模型肺組織和患者臨床標本中的卡氏肺孢子蟲(Pneumocystis carinii,Pc)DNA.1.PCP大鼠模型的建立、Pc檢測及實驗標本的采集;采用SD大鼠,醋酸潑尼松龍腹股溝皮下注射2個月,誘導建立PCP動物模型.結果

2、:病原學檢查結果顯示成功建立了PCP動物模型.檢測結果顯示,吉氏染色檢出率為80﹪,快速銀染檢出率為50﹪,PCR檢出率為95﹪,后者明顯高于吉氏染色和快速銀染法.PCP動物模型的誘導成功及肺組織的獲得為后續(xù)的實驗研究奠定了基礎.2.Pc特異性目的基因的獲得及序列測定;以Wakefield等設計的PAZ102-E和PAZ102-H為引物,采用常規(guī)PCR擴增Pc的線粒體核糖體RNA大亞基(LSU mt rRNA)基因.結果:測序結果顯示所

3、得基因片段長為357bp,與GeneBank中的已有序列比對,結果顯示所得基因與Sinclair等公布的Pc LSU mt rRNA基因的同源性為99﹪,故確認是Pc特異的基因.以獲得的Pc特異性DNA為模板,采用隨機引物法制備地高辛標記的非放射性探針.以已知濃度的地高辛標記的DNA為參照確定探針的濃度,隨后檢測該探針的特異性和敏感性.結果:實驗中所得探針濃度為30ng/ul,顯色敏感性為1pg,雜交敏感性為2pg,特異性檢測顯示該探針

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