樹突狀細(xì)胞促進LAK細(xì)胞對小鼠卵巢癌抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：本研究在體外利用小鼠卵巢癌OVHM腫瘤細(xì)胞抗原致敏小鼠樹突狀細(xì)胞，并與小鼠LAK細(xì)胞共培養(yǎng)，研究腫瘤抗原致敏的DC對LAK細(xì)胞體內(nèi)外抗腫瘤作用的影響，為臨床綜合利用DC和LAK細(xì)胞治療腫瘤提供實驗依據(jù)。 方法： 1.取對數(shù)生長期的OVHM細(xì)胞制備腫瘤抗原。 2.DC的制備和鑒定：從小鼠腿骨中獲得骨髓細(xì)胞，加入抗CD4、抗CD8a、抗B220、抗Ter119和抗CD11b單克隆抗體，應(yīng)用免疫磁珠陰性篩選法(M

2、ini-MACS)去除粒細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，rmGM-CSF和rmIL-4體外培養(yǎng)，以獲得大量高純度DC。在DC培養(yǎng)過程中加入小鼠OVHM卵巢癌細(xì)胞凍融抗原致敏DC。流式細(xì)胞儀檢測DC的免疫表型，ELISA法檢測DC培養(yǎng)上清分泌的細(xì)胞因子IL-12。 3.LAK細(xì)胞的制備和激活：無菌制備小鼠脾細(xì)胞懸液，利用梯度密度離心法收獲脾淋巴細(xì)胞，體外IL-2培養(yǎng)擴增誘導(dǎo)為LAK細(xì)胞。腫瘤抗原致敏的DC與LA

3、K細(xì)胞共培養(yǎng)，收獲DC-LAK細(xì)胞。 4.DC誘導(dǎo)LAK細(xì)胞的體外殺傷實驗：效應(yīng)細(xì)胞分為小鼠脾淋巴細(xì)胞組、單純LAK細(xì)胞組和與腫瘤抗原致敏DC共培養(yǎng)LAK細(xì)胞組(DC-LAK)；靶細(xì)胞為小鼠OVHM卵巢癌細(xì)胞，分別在效靶比為10∶1及50∶1的條件下以MTT法檢測LAK細(xì)胞的體外殺傷活性。 5.動物實驗：將小鼠OVHM卵巢癌細(xì)胞(5×105/只)接種于C57BL/6N×C3H/He雜交一代(B6C3F1)雌性小鼠右前肢腋

4、窩皮下建立腫瘤模型，并隨機分為四組，即：對照組(單純注射PBS)、LAK治療組、腫瘤抗原致敏DC治療組、DC-LAK治療組，每組6只。治療從荷瘤第2天開始，收集LAK細(xì)胞、經(jīng)OVHM抗原致敏DC和DC-LAK細(xì)胞，記數(shù)調(diào)整細(xì)胞濃度為1×108/ml，0.1ml/只，荷瘤周圍皮下注射。從荷瘤第6天開始，每隔2天測一次腫瘤大小，按公式V=πab2/6計算瘤體積，第30天處死小鼠，剝離腫瘤組織稱重并觀察各組抑瘤效果有無差異。 結(jié)論：1