版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、TNF-α是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,以26kDa膜蛋白的形式表達(dá)于細(xì)胞膜表面(transmembrane tumor necrosis factor,tmTNF-α),在金屬基質(zhì)蛋白酶或其它酶類的作用下剪切為17 kDa的可溶性分子(secret tumor necrosis factor, sTNF-α),參與細(xì)胞的凋亡,增殖和分化。兩型TNF-α通過其特異性受體(TNFR1和TNFR2)介導(dǎo)生物學(xué)活性,而tmTNF-α與T
2、NFR2親和力高于sTNF-α,二者生物學(xué)效應(yīng)不盡相同。
本課題組前期工作以及國外的研究表明,在抗腫瘤方面,tmTNF-α可殺傷對(duì)sTNF-α耐受的腫瘤細(xì)胞株,其殺瘤譜更廣:前者主要誘導(dǎo)凋亡,后者主要誘導(dǎo)壞死。tmTNF-α在體內(nèi)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞表達(dá)Fas,通過FasL/Fas途徑殺傷腫瘤;而sTNF-α則主要通過誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞浸潤,促進(jìn)抗腫瘤免疫發(fā)揮效應(yīng)。tmTNF-α與受體結(jié)合后,可通過受體介導(dǎo)的正向信號(hào)抑制NF-kB,誘導(dǎo)腫
3、瘤細(xì)胞凋亡;但是腫瘤細(xì)胞自身高表達(dá)tmTNF-α則可通過反向信號(hào)引起NF-kB活化,促進(jìn)細(xì)胞存活,抵抗凋亡刺激信號(hào)。由此可見TNF-α的膜分子與其可溶性分子在生理和病理生理作用上可能存在很大差異。
TNFR1信號(hào)傳導(dǎo)通路的分子機(jī)理已了解得十分清楚。但是,tmTNF-α如何啟動(dòng)TNFR2凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑尚不清楚。且兩型TNF-α生物學(xué)活性差異的分子機(jī)制是什么?也是亟待研究和解決的問題。
本研究上篇旨在比較兩型TNF-α
4、通過TNFR2信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和生存信號(hào)的差異及其分子機(jī)制,下篇?jiǎng)t探討脂筏在兩型TNF-α通過TNFR1殺傷效應(yīng)中的作用及其機(jī)制,該研究不但深入闡明兩型TNF-α的生物學(xué)功能及其分子機(jī)制,而且為抗腫瘤治療提供新的分子靶點(diǎn)和干預(yù)線索。
上篇比較兩型TNF-α通過TNFR2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和生存信號(hào)的差異其主要研究結(jié)果如下:
一、兩型TNF-α通過TNFR2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或生存
1.效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞的選擇
5、> 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面膜蛋白表達(dá)率分別為:穩(wěn)轉(zhuǎn)人tmTNF-α的NIH3T3細(xì)胞系表面tmTNF-α表達(dá)率為47.7%,可作為表達(dá)tmTNF-α的效應(yīng)細(xì)胞;HL-60細(xì)胞TNFR2表達(dá)量高,而TNFR1表達(dá)量低,故用該細(xì)胞作為靶細(xì)胞,研究TNFR2信號(hào)通路。
2.兩型TNF-α對(duì)HL-60細(xì)胞的殺傷效應(yīng)不同
兩型TNF-α通過TNFR2對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生死亡或生存效應(yīng),tmTNF-α通過TNFR2促使腫瘤細(xì)胞凋亡,
6、而sTNF-α則通過TNFR2介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的生存。
3.兩型TNF-α對(duì)HL-60細(xì)胞周期的影響
tmTNF-α組可使G2期的細(xì)胞數(shù)下降,但與之相比,G1細(xì)胞下降更為明顯,降低61%;而sTNF-α組S期與control相比略有下降,但無顯著差異。這一結(jié)果表明,tmTNF-α主要誘導(dǎo)G1期細(xì)胞凋亡。
4.蛋白合成對(duì)兩型TNF-α效應(yīng)的影響不同
與對(duì)照組相比,tmTNF-α可有效殺傷HL-60,其殺
7、傷率79%,加入蛋白合成抑制劑放線菌酮可明顯抑制tmTNF-α對(duì)HL-60細(xì)胞的殺傷。sTNF-α對(duì)HL-60無明顯殺傷,加入放線菌酮使sTNF-α對(duì)HL-60的胞毒作用敏感性增加,其殺傷率為38%。提示tmTNF-α的胞毒作用需要依賴蛋白質(zhì)合成,而sTNF-α與tmTNF-α完全不同,其殺傷靶細(xì)胞需要抑制蛋白合成。
5.轉(zhuǎn)染TNFR1 siRNA對(duì)tmTNF-α殺傷HL-60細(xì)胞無影響
轉(zhuǎn)染TNFR1 siRNA與
8、未轉(zhuǎn)染組相比,對(duì)tmTNF-α的殺傷效應(yīng)無明顯影響, tmTNF-α仍然可有效地殺傷HL-60,其殺傷率為77%(***p<0.001.vs NIH3T3)。這一結(jié)果提示TNFR1不介導(dǎo)tmTNF-α對(duì)HL-60細(xì)胞的殺傷。
6.轉(zhuǎn)染TNFR2 siRNA可顯著降低tmTNF-α對(duì)HL-60細(xì)胞的殺傷
未轉(zhuǎn)染組中,tmTNF-α可有效地殺傷HL-60,其殺傷率為63%(***p<0.001.vs NIH3T3),而s
9、TNF-α卻無殺傷作用。但是,當(dāng)轉(zhuǎn)染了TNFR2 siRNA后,tmTNF-α的殺傷效應(yīng)顯著降低(***p<0.001.vs tmTNF-α/NIH3T3),而對(duì)sTNF-α則無影響。該結(jié)果表明tmTNF-α對(duì)HL-60的殺傷主要依賴TNFR2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。
二、tmTNF-α通過TNFR2募集死亡信號(hào),解離生存信號(hào)
我們前期工作利用TNFR2抗體進(jìn)行IP-Western,證實(shí)tmTNF-α通過TNFR2募集FADD
10、、RIP與caspase8等死亡信號(hào),而sTNF-α則通過TNFR2募集TRAF1、TRAF2、TRAF3、cIAP1、cIAP2和cFLIP等抗凋亡和生存信號(hào),但是,tmTNF-α卻導(dǎo)致這一生存信號(hào)的喪失。我們假設(shè)tmTNF-α導(dǎo)致某些接頭分子的降解,進(jìn)而使生存信號(hào)與TNFR2解離。
1. tmTNF-α通過TNFR2使TRAF2與cIAP-1發(fā)生泛素化而被降解
2. tmTNF-α通過TNFR2抑制抗凋亡分子cF
11、LIP合成
3. tmTNF-α通過TNFR2介導(dǎo)NF-κB失活,而sTNF-α則通過TNFR2介導(dǎo)NF-κB的經(jīng)典和非經(jīng)典途徑的活化
下篇脂筏在兩型TNF-α通過TNFR1殺傷效應(yīng)中的作用及其機(jī)制
其主要結(jié)果如下:
一、脂筏可促進(jìn)tmTNF-α的胞毒效應(yīng),卻抑制sTNF-α的殺傷作用
二、脂筏抑制sTNF-α殺傷作用的機(jī)制
1.脂筏下調(diào)sTNF-α在胞漿內(nèi)通過TNFR1募集D
12、ISC死亡信號(hào),促進(jìn)sTNF-α在胞膜上通過TNFR1募集TRAF2和RIP1等生存信號(hào)
2.脂筏阻止sTNF-α誘導(dǎo)caspase8和caspase3的活化
三、脂筏促進(jìn)tmTNF-α胞毒效應(yīng)的機(jī)制:
1.脂筏促進(jìn)tmTNF-α對(duì)caspase8和caspase3的活化
2.脂筏外TRAF2可部分拮抗tmTNF-α的殺傷作用
3.脂筏外TRAF2可抑制tmTNF-α誘導(dǎo)的DISC信號(hào)<
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- tmTNF-α在胰島素抵抗中的作用及其機(jī)制.pdf
- 脂筏對(duì)tmTNF-a雙向信號(hào)影響的研究.pdf
- tmTNF-α在肥胖誘導(dǎo)胰島素抵抗中的作用及其機(jī)制.pdf
- tmTNF-α在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)與化療耐藥的關(guān)系.pdf
- 人tmTNF-α單鏈抗體的構(gòu)建、表達(dá)及其生物學(xué)活性鑒定.pdf
- 囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)的動(dòng)態(tài)跟蹤及其與脂筏關(guān)系的初步研究.pdf
- tmTNF-α啟動(dòng)TNFR2凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究.pdf
- TNFR1的內(nèi)化與脂筏關(guān)系的探討.pdf
- 脂筏、非脂筏質(zhì)膜微域內(nèi)層磷脂結(jié)構(gòu)的分析.pdf
- 細(xì)胞應(yīng)激效應(yīng)及其分子機(jī)制的初步研究.pdf
- 關(guān)系自我參照效應(yīng)及其腦機(jī)制的研究.pdf
- CD226分子與臨床疾病的關(guān)系及其分子機(jī)制.pdf
- 關(guān)系自我參照效應(yīng)及其腦機(jī)制的研究
- 高脂飼養(yǎng)大鼠腎臟微血管病變與脂毒性的關(guān)系及其機(jī)制研究.pdf
- GNAO1與胃癌預(yù)后的關(guān)系及其分子機(jī)制研究.pdf
- 有機(jī)膨潤土的構(gòu)-效關(guān)系及其分子作用機(jī)制.pdf
- STAT1參與tmTNF-α通過TNFR1非DD結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究.pdf
- 小分子化合物As2S2對(duì)白血病干細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及其作用機(jī)制的初步研究.pdf
- 脂筏調(diào)控GABAB受體轉(zhuǎn)激活I(lǐng)GF-1受體的機(jī)制研究.pdf
- 恒定自然殺傷T細(xì)胞在脂多糖誘導(dǎo)的炎癥性早產(chǎn)中的作用及其機(jī)制探討.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論