小分子化合物As2S2對白血病干細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及其作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：小分子化合物As2S2對白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及其作用機(jī)制的研究
　　 目的：觀察 As2S2對白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)，揭示其殺傷機(jī)制，探索聯(lián)用PI3K抑制劑 PI-103時(shí)二者對白血病細(xì)胞的治療獲益。
　　 方法：以不同濃度的 As2S2作用白血病細(xì)胞不同時(shí)間后，應(yīng)用 MTT 試驗(yàn)檢測 As2S2對白血病細(xì)胞的增殖抑制；流式細(xì)胞術(shù)及 MGG 染色檢測 As2S2及 PI-103單

2、用或聯(lián)用時(shí)對白血病細(xì)胞、臍血單個(gè)核細(xì)胞及白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞的分化及凋亡誘導(dǎo)作用；克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測 As2S2對白血病細(xì)胞克隆的清除能力；細(xì)胞免疫熒光、Western blot、Real-time PCR 及 Real-time PCR array檢測 As2S2對 PML和PI3K信號通路中多個(gè)信號分子的蛋白及轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。
　　 結(jié)果：As2S2以時(shí)間、劑量依賴性方式抑制白血病細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡，抑制白血病細(xì)胞的克隆

3、形成能力。As2S2作用后，PML蛋白的表達(dá)被顯著下調(diào)，但轉(zhuǎn)錄水平無明顯變化。PI3K信號通路中關(guān)鍵蛋白磷酸化水平短時(shí)間內(nèi)被激活，隨著作用時(shí)間的延長則轉(zhuǎn)為下調(diào)，該通路基因變化的總體趨勢是被下調(diào)。As2S2和 PI-103聯(lián)用對白血病細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)起到了協(xié)同增強(qiáng)的效應(yīng)，但對正常的單個(gè)核細(xì)胞無明顯的毒副作用。
　　 結(jié)論：As2S2可能通過降調(diào)PML蛋白表達(dá)、長時(shí)間作用后抑制PI3K信號通路對白血病細(xì)胞顯示出的時(shí)間、劑量依賴性殺傷效

4、應(yīng)，PI-103可協(xié)同增強(qiáng)上述效應(yīng)，但對正常的單個(gè)核細(xì)胞無明顯的毒副作用，具有較高的治療指數(shù)。
　　 第二部分：小分子化合物As2S2對白血病干細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及其作用機(jī)制的初步研究
　　 目的：檢測小分子化合物As2S2單用或聯(lián)用PI-103時(shí)對白血病干細(xì)胞的殺傷效應(yīng)，初步研究其作用機(jī)制。
　　 方法：應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分選白血病干細(xì)胞；經(jīng)As2S2及 PI-103單獨(dú)或聯(lián)合處理后，流式細(xì)胞術(shù)檢測各組白血病干細(xì)胞的凋

5、亡和分化；克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測藥物干預(yù)后白血病干細(xì)胞及正常造血干細(xì)胞克隆形成能力的變化；多色流式細(xì)胞儀檢測 As2S2作用后白血病干細(xì)胞內(nèi) p-AKT473表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。
　　 結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)分選的 CD34+CD38-細(xì)胞占患者骨髓細(xì)胞總數(shù)的75.4%，分選純度為96.4%。Anti-ki67-Hoechst 染色分析表明 G0期細(xì)胞占83.9%，G1細(xì)胞期占7.93%。500 nmol/L的 As2S2和 1 μmol/L

6、PI-103分別單獨(dú)作用時(shí)，細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)并不明顯，而兩者聯(lián)用時(shí)，凋亡率則從17.26%躍升至31.02%。As2S2和 PI-103均有一定程度的白血病細(xì)胞克隆清除能力，二者聯(lián)用時(shí)對白血病細(xì)胞克隆的清除能力顯著增強(qiáng)。在有效清除白血病克隆的藥物濃度范圍內(nèi)，二者對正常造血干細(xì)胞的克隆形成能力無明顯影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，As2S2處理組細(xì)胞 CD11b表達(dá)升高，PI-103處理組 CD11b表達(dá)無明顯變化，As2S2與 PI-103聯(lián)