腺苷A-,2A-受體與空間學習記憶的關(guān)系及調(diào)節(jié)機制的研究.pdf

1、目的：本研究采用藥物干預(yù)和基因敲除兩種手段探討腺苷A<,2A>受體對小鼠空間學習記憶過程的影響,通過測定不同腦區(qū)的cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)的表達,尋找其可能的調(diào)節(jié)機制. 方法：(1)實驗分組:①藥物干預(yù)(包括腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因和特異性拮抗劑DPCPX、SCH58261):選用清潔級C57BL/6J雄性小鼠73只,隨機分成5組:第1組為腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因低劑量組(n=15),腹腔注射咖啡因(10mg

2、/kg);第2組為咖啡因高劑量組(n=15),腹腔注射咖啡因(50mg/kg);第3組為腺苷A1受體特異性拮抗劑組(n=10),腹腔注射DPCPX(5mg/kg);第4組為腺苷A2A受體特異性拮抗劑組(n=10),腹腔注射SCt{58261(5mg/kg);第5組為對照組(n=23),腹腔注射等量的生理鹽水.每天給藥一次,行為學訓練結(jié)束后立即給藥.②基因敲除:選用腺苷A<,2A>受體基因敲除小鼠模型(A2ARKO組,n=8)和同窩野生型

3、小鼠(WT組,n=8). (2)觀察指標:①行為學檢測方法:采用Morris水迷宮實驗方法和八臂迷宮實驗方法分別檢測其空間參考記憶和工作記憶能力.②分子生物學指標:采用免疫印跡(Western Blot)實驗方法測定各組小鼠不同腦區(qū)海馬和紋狀體CREB蛋白的表達量. 結(jié)果： (1)行為學檢測結(jié)果:①腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因小劑量(10mg/kg)組與高劑量(50mg/kg)組及對照組相比Morris水迷宮的定

4、位航行試驗的逃避潛伏期顯著縮短,空間搜索試驗穿越原平臺位置的次數(shù)顯著增多.②腺苷A<,1>受體特異性的拮抗劑DPCPX和A<,2A>受體特異性的拮抗劑SCH58261對小鼠Morris水迷宮的定位航行試驗的潛伏期和空間探索能力無明顯影響.③腺苷A<,2A>受體基因敲除小鼠在Morris水迷宮重復(fù)獲得試驗中工作記憶成績顯著優(yōu)于野生型,在8-臂迷宮訓練中工作記憶錯誤數(shù)顯著少于野生型;而Morris水迷宮定位航行和空間探索試驗成績無顯著性差異

5、;8-臂迷宮訓練中空間參考記憶錯誤數(shù)兩組沒有顯著性差異. (2)Western Blot實驗結(jié)果:①腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因小劑量(10mg/kg)組海馬組織CREB表達量明顯高于咖啡因高劑量(50mg/kg)組及對照組,而不同劑量咖啡因?qū)y狀體組織的CREB表達量的影響與對照組相比無顯著性差異;②腺苷A<,1>受體拮抗劑DPCPX和A<,2A>受體拮抗劑SCH58261對小鼠海馬及紋狀體組織表達CKEB量的影響無明顯差異;

6、③腺苷A<,2A>R基因敲除小鼠海馬及紋狀體組織的CREB表達量與野生型組相比無明顯差異. (3)結(jié)果提示:①腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因小劑量能夠提高小鼠的空間學習記憶能力,增加有關(guān)腦區(qū)記憶相關(guān)蛋白CREB的合成,而高劑量咖啡因?qū)臻g學習記憶無明顯影響;②腺苷A<,1>和A<,2A>受體特異性拮抗劑對空間學習記憶影響無明顯影響;③而腺苷A<,2A>R基因敲除小鼠表現(xiàn)為空間工作記憶增強,腦內(nèi)記憶相關(guān)蛋白CREB的合成無變化.

7、 結(jié)論： ①基因敲除腺苷A<,2A>受體顯著增強空間工作記憶,對空間學習記憶的也有調(diào)節(jié),它對空間工作記憶的影響更為顯著;可見腦內(nèi)腺苷作用于A<,2A>受體參于小鼠的空間記憶(特別是空間工作記憶)的調(diào)節(jié). ②腺苷受體非特異性受體拮抗劑咖啡因小劑量能夠提高小鼠的空間學習記憶能力,同時增加有關(guān)腦區(qū)記憶相關(guān)蛋白CREB的合成,但高劑量咖啡因?qū)臻g學習記憶無明顯影響;因為腦腺苷A<,2A>受體是小劑量(但不是高劑量)咖啡因的主