腺苷A-,2A-受體對大鼠小體積肝移植缺血再灌注損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、全文分為四部分： 第一部分 大鼠小體積肝移植模型的建立及其缺血再灌注損傷的初步研究 目的：建立穩(wěn)定實用的大鼠小體積肝移植模型，并通過檢測一些缺血再灌注損傷的指標，觀察大鼠小體積肝移植術后缺血再灌注損傷的程度。 方法：健康雄性SD大鼠，體重為250g～330g，隨機化分為供體組和受體組，取供體大鼠肝臟右中葉和右上、下側(cè)葉為移植物，占受體大鼠肝重的36％～46％。門靜脈、肝下下腔靜脈采用改良的二袖套法吻合。觀察受體大

2、鼠移植術后24小時和7天生存率，死亡后解剖，分析死亡原因。以術前正常大鼠作為對照組，使用AsT測定試劑盒檢測受體大鼠術后24小時內(nèi)血清AsT的變化；酶促反應法測定移植術后6小時肝組織丙二醛(MDA)含量；觀察移植術后6小時小體積供肝光鏡和電鏡下組織學變化；TUNEL法檢測小體積供肝移植術后6小時肝細胞凋亡情況。 結(jié)論:建立了穩(wěn)定的大鼠小體積肝移植模型，可用于小體積肝移植的實驗研究；大鼠小體積供肝移植術后表現(xiàn)出嚴重的缺血再灌注損傷

3、。 第二部分 A<,2A>R對大鼠小體積肝移植缺血再灌注后氧化應激反應的作用研究 目的:通過選擇性激活腺苷A<,2A>受體(A<,2A>R)，觀察大鼠小體積肝移植術后氧化應激反應的變化，探討A<,2A>R激活對減輕大鼠小體積肝移植缺血再灌注后氧化應激反應的作用及機制。 方法：供肝獲取后置于4℃冰冷生理鹽水中修整保存80分鐘，然后移植給同種受體大鼠。受體大鼠右側(cè)頸外靜脈置管，CGS組(n=15)于門靜脈血流再開放的

4、同時使用微量泵以0.5μg/kgmin速度持續(xù)靜脈輸入選擇性A<,2A>R激動劑CGS21680 3小時；CGS+ZM組(n=15)使用CGS21680的同時，微量泵以0.5μg/kg/min速度持續(xù)輸入A<,2A>R的特異性抑制劑ZM241385 3小時；對照組(n=15)處理同實驗組，但在移植肝門靜脈血流再開放時僅給予與實驗組相同劑量和速度的生理鹽水(25 μl/kg/min)。各組隨機抽取9只用于生存率研究；余6只移植后6小時分別

5、取材進行相關檢測，比較抗氧化劑(GSH，TOC，AA)的含量、抗氧化酶(SOD，CAT，GSH-Px)的活性以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量。 結(jié)論：大鼠小體積肝移植缺血再灌注后產(chǎn)生大量氧自由基導致肝臟氧化損傷。A<,2A>R的激活可提高抗氧化酶活性，促進抗氧化物質(zhì)的產(chǎn)生，增強機體抵御氧化應激的能力，緩解脂質(zhì)過氧化狀態(tài)，從而減輕小體積肝移植缺血再灌注后氧化應激反應，提高了小體積肝移植術后受體大鼠的生存率。 第三部

6、分 A<,2A>R對大鼠小體積肝移植缺血再灌注后炎性反應的作用研究 目的:通過選擇性激活A<,2A>R，觀察大鼠小體積肝移植術后炎性反應的變化，探討A<,2A>R激活對減輕大鼠小體積肝移植缺血再灌注后炎性反應的作用及機制。 方法:實驗分組、動物模型的建立及給藥方法同第二部分。于門靜脈血流開放的同時分別予CGS21680(0.5μg/kg/min，CGS組)(n=6)、CGS21680(0.5μg/kg/min)+ZM24

7、1385(0.5μg/kg/min)(CGS+ZM組)(n=6)或生理鹽水(25μl/kg/min，對照組)(n=6)持續(xù)輸入3小時。 各組移植后6小時分別取材，采用RT-PCR及ELISA方法比較炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抗炎因子IL-10的基因及蛋白表達水平；通過檢測髓性過氧化物酶(MPO)活性以反映中性粒細胞浸潤情況；同時對肝臟組織進行HE染色及電鏡觀察。 結(jié)論:大鼠小體積肝移植缺血再灌注后釋放大量

8、炎性因子，產(chǎn)生強烈的炎性反應。A<,2A>R的激活可降低小體積肝移植后大鼠肝臟內(nèi)炎性因子TNF-α、IL-1β以及IL-6的蛋白和基因水平的表達，從而減輕其炎性反應，在小體積肝移植缺血再灌注損傷中起保護作用。 第四部分 A<,2A>R對大鼠小體積肝移植缺血再灌注后細胞凋亡的作用研究 目的:通過選擇性激活A<,2A>R，觀察大鼠小體積肝移植術后細胞凋亡的變化，探討A<,2A>R激活對減輕大鼠小體積肝移植缺血再灌注后細胞凋亡

9、的作用及機制。 方法:實驗分組、動物模型的建立及給藥方法同第二、三部分。于門靜脈血流開放的同時分別予CGS21680(0.5μg/kg/min，CGS組)(n=6)、CGS21680(0.5μg/kg/min)+ZM241385(0.5μg/kg/min)(CGS+ZM組)(n=6)或生理鹽水(25μl/kg/min，對照組)(n=6)持續(xù)輸入3小時。 各組移植后6小時分別取材，Western Blot法檢測凋亡抑制蛋白