中藥護(hù)骨膠囊對(duì)糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的：糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids,GCs)是臨床上應(yīng)用較多的一類藥物，但是大劑量應(yīng)用GCs可能導(dǎo)致多種并發(fā)癥，糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松(glucocorticoid-induced osteoporosis,GIO)就是其中之一。GIO先是引起骨丟失，繼而導(dǎo)致骨折，嚴(yán)重影響了患者的健康狀況和生活質(zhì)量。目前臨床上防治骨質(zhì)疏松(osteoporosis，OP)所用的西藥多以局部靶點(diǎn)為作用位點(diǎn)，這種療法對(duì)OP這種多因多果的代謝性疾

2、病的治療存在著一定的局限性。中醫(yī)強(qiáng)調(diào)辨證施治，即將疾病的某一階段的病理、生理改變歸納為“證”。根據(jù)“證”這一整體水平的疾病的認(rèn)識(shí)，從臟腑的聯(lián)系，人和自然關(guān)系等方面，多途徑、多靶點(diǎn)調(diào)節(jié)機(jī)體的動(dòng)態(tài)平衡。因此從中醫(yī)藥中尋找治療GIO的藥物意義重大。
　　 東莞萬(wàn)成制藥有限公司生產(chǎn)的中藥-護(hù)骨膠囊(HuGu capsule,HG)，已獲得專利證書和新藥證書批文。它以補(bǔ)腎、健脾、活血化瘀組方。前期研究發(fā)現(xiàn)：HG防治原發(fā)性骨質(zhì)疏松療效顯著，

3、而且該藥具有多方面調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的作用。中醫(yī)認(rèn)為GIO的發(fā)病與腎虛有關(guān)，因而根據(jù)HG的組方，推測(cè)其可能具有預(yù)防GIO的作用。為了探討HG是否可以預(yù)防GIO，本課題通過(guò)GCs誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物GIO，采用骨形態(tài)計(jì)量學(xué)和骨生物力學(xué)的方法，觀察HG對(duì)GIO的預(yù)防作用，為開(kāi)發(fā)HG的新用途提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：將60只3m齡SPF級(jí)雌性SD大鼠隨機(jī)分為6組：正常組、模型組、骨松寶組(陽(yáng)性對(duì)照組)和護(hù)骨膠囊低、中、高劑量組(Ctrl

4、、Mod、GSB、HG-L、HG-M、HG-H)，每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，進(jìn)行如下干預(yù)：1.地塞米松(dexamethasone,Dex)造模：造模大鼠(除Ctrl組外其余各組的大鼠)每周兩次肌肉注射Dex，每次2.5mg/0.5ml/kg，Ctrl組注射等劑量的生理鹽水。2.藥物干預(yù)(每日)：Ctrl組灌服生理鹽水(10ml/kg)，GSB組灌服等劑量的GSB(0.3g/10ml/kg)，HG-L、M和H組分別灌服等劑量的HG(

5、0.27g、0.81g、2.43 g/10ml/kg)。各組大鼠飼養(yǎng)條件相同，每w稱量并記錄體重一次，按體重調(diào)整給藥劑量，共計(jì)給藥6w。
　　 所有動(dòng)物在藥物干預(yù)結(jié)束前14d、13d及3d、2d頸部皮下注射鈣黃綠素(5mg/kg)，進(jìn)行兩次熒光標(biāo)記。藥物干預(yù)結(jié)束時(shí)，心臟抽血處死大鼠，取其肝臟、腎臟等臟器并記錄重量；取左側(cè)脛骨上段(proximal tibia,PTM松質(zhì)骨)和中段(tibia shaft,TX皮質(zhì)骨)進(jìn)行形態(tài)計(jì)量

6、學(xué)檢測(cè)；取左側(cè)股骨(left femur,LF皮質(zhì)骨)和第五腰椎(fifth lumbar vertebra,LV松質(zhì)骨)進(jìn)行骨生物力學(xué)檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1.Dex及HG對(duì)大鼠體重和臟器重量的影響
　　 (1)Dex及HG對(duì)大鼠體重的影響
　　 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)時(shí)，各組體重相近(203.7g～209.9g)，Ctrl組的體重隨著時(shí)間(6w)增長(zhǎng)迅速，每w平均增長(zhǎng)12.31g；而相應(yīng)的Mod組的體重卻增長(zhǎng)

7、緩慢，每w平均增長(zhǎng)4.94g，甚至出現(xiàn)體重下降的情況。兩組的體重從第2w開(kāi)始即具有顯著性差異(P＜0.01)。HG-L、M、H組的體重與Mod組的體重相比，沒(méi)有顯著性差異。
　　 (2)Dex及HG對(duì)大鼠不同臟器重量的影響
　　 與Ctrl組相比，Mod組的脾臟、肝臟、腎臟的重量顯著性降低(前者P＜0.05；后兩者P＜0.01)；肺臟的重量沒(méi)有變化。與Mod組相比：HG-M組的腎臟重量顯著增加(P＜0.05)，并且高于G

8、SB組(P＜0.05)。
　　 2.Dex及HG對(duì)大鼠TX皮質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響
　　 (1)Dex對(duì)大鼠TX皮質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響
　　 靜態(tài)參數(shù)：與Ctrl組相比：Dex明顯減少TX皮質(zhì)骨的骨量[％]Ct.Ar，增大骨髓腔的面積[％]Ma.Ar，兩組之間這兩個(gè)參數(shù)的差異均達(dá)到了顯著性水平(P＜0.01)。動(dòng)態(tài)參數(shù)：與Ctrl組相比：Dex造成TX皮質(zhì)骨骨內(nèi)膜的骨形成指標(biāo)[％]E-L.Pm和E-BFR/BS顯著

9、降低(P＜0.05)和骨吸收指標(biāo)([％]E-Er.Pm)顯著升高 (P＜0.01)，而兩組之間骨外膜的各項(xiàng)指標(biāo)沒(méi)有顯著性差異。
　　 (2)HG對(duì)Dex造模大鼠TX皮質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響
　　 靜態(tài)參數(shù)：與Mod組相比，HG-L、M組TX皮質(zhì)骨的骨量([％]Ct.Ar)顯著提高而骨髓腔的面積([％]Ma.Ar)顯著降低(P＜0.01)，這與GSB組的結(jié)果一致。
　　 動(dòng)態(tài)參數(shù)：與Mod組相比，低、中、高劑量的HG

10、-均可增加TX皮質(zhì)骨骨內(nèi)膜面的[％]E-L.Pm(分別為：56.37[％]、73.71[％]、52.15[％])，三組數(shù)據(jù)均高于GSB組(M組P＜0.01；其余兩組P＜0.05)；低中劑量的HG均可增加E-BFR/BS (分別為：125.36[％],155.36[％])(L組P＜0.05，M組P＜0.01)，此兩數(shù)據(jù)也高于GSB組(P＜0.05)，HG-L、M兩組之間存在劑量依賴關(guān)系；HG-M的[％]E-L.Pm和E-BFR/BS還高于

11、Ctrl組。而且，中、高劑量的HG還減小了TX皮質(zhì)骨骨內(nèi)膜的[％]E-Er.Pm(P＜0.01)。
　　 3.Dex及HG對(duì)大鼠PTM松質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響
　　 (1)Dex對(duì)大鼠PTM松質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響
　　 與Ctrl組相比，Mod組PTM松質(zhì)骨的靜態(tài)參數(shù)和動(dòng)態(tài)參數(shù)均無(wú)顯著性變化。
　　 (2)HG對(duì)大鼠PTM松質(zhì)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響
　　 靜態(tài)參數(shù)：與Mod相比，中劑量的HG增加了PTM

12、松質(zhì)骨的骨量([％]Tb.Ar)(p<0.05)，HG-M組PTM松質(zhì)骨的骨量也高于Ctrl組和GSB組(p<0.05)。HG-H組骨小梁的寬度(Tb.Wi)寬于GSB組(p<0.05)。動(dòng)態(tài)參數(shù)：與Mod相比，HG-M增加了PTM松質(zhì)骨的骨礦化沉積率(MAR)(P＜0.01)，并且HG-M組的MAR高于HG-L組和GSB組(P＜0.05)；HG-M組使骨吸收指標(biāo)(Oc.N)顯著降低，且低于HG-L組和Ctrl組(前者P＜0.05；后者

13、P＜0.01)。
　　 4.Dex及HG對(duì)大鼠LF皮質(zhì)骨和LV松質(zhì)骨生物力學(xué)性能的影響
　　 (1)Dex對(duì)大鼠LF皮質(zhì)骨和LV松質(zhì)骨的生物力學(xué)性能的影響與Ctrl組相比，Mod組大鼠LF皮質(zhì)骨的三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)和LV松質(zhì)骨的壓縮實(shí)驗(yàn)的生物力學(xué)參數(shù)無(wú)差異。
　　 (2)HG對(duì)大鼠LF皮質(zhì)骨和LV松質(zhì)骨的生物力學(xué)性能的影響與Mod組相比，HG對(duì)大鼠LF皮質(zhì)骨的生物力學(xué)性能參數(shù)沒(méi)有影響；但HG-M組LV松質(zhì)骨的最大載荷(

14、Max load)、最大應(yīng)力(Max stress)和最大變形(Max deflection)均顯著升高(P＜0.05)。HG-H組的Max deflection與HG-M相比，顯著降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.短期、間斷使用Dex(6w，2.5 mg/kg，2/w)，僅使大鼠皮質(zhì)骨丟失，由于骨骼幾何形狀的變化符合力學(xué)的結(jié)構(gòu)要求，因而并未改變骨骼的生物力學(xué)性能。此結(jié)果提示Dex的短期使用對(duì)大鼠不同部位的

15、骨骼影響程度不同，松質(zhì)骨還未出現(xiàn)骨變化，即出現(xiàn)皮質(zhì)骨的骨丟失。
　　 2.中藥HG可以預(yù)防Dex誘導(dǎo)的大鼠皮質(zhì)骨的骨丟失，HG-M的效果要比HG-L、H好。其機(jī)理為通過(guò)增加骨內(nèi)膜的骨形成的指標(biāo)-熒光周長(zhǎng)和骨形成率，并且降低破骨細(xì)胞的骨吸收率，從而增加皮質(zhì)骨的骨量。雖然Dex未造成松質(zhì)骨的骨丟失，但與Dex和Ctrl比，HG-M仍可促進(jìn)松質(zhì)骨的形成和礦化，抑制破骨細(xì)胞的吸收，進(jìn)而增加松質(zhì)骨的骨量。而且，HG-M還改善了大鼠腰椎松質(zhì)