應(yīng)用SELDI-TOF-MS篩選激素耐藥型腎病綜合征患兒尿液生物標(biāo)志物的研究.pdf

1、目的:原發(fā)性腎病綜合征(primary nephrotic syndrome，INS)為兒童常見的腎臟疾病，糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid，GC)為目前公認(rèn)治療INS的主要藥物，INS的轉(zhuǎn)歸很大程度上取決于患兒對GC治療敏感抑或耐藥情況，激素敏感型腎病綜合征(steroid-sensitive NS，SSNS)在接受激素治療后，病情能得到及時有效的控制，而激素耐藥型腎病綜合征(steroid-resistant NS,SRNS

2、)對GC的治療卻表現(xiàn)為無效應(yīng)或部份效應(yīng)，其病情容易遷延反復(fù)，最終發(fā)展為終末期腎病的幾率明顯增加。迄今，沒有明確的實驗室參數(shù)能早期鑒別SRNS。我們用表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry SEIDI-TOF-MS)技術(shù)結(jié)合蛋白質(zhì)芯片檢測SRNS，SSNS患兒激素治療前尿液蛋白質(zhì)譜的差異性表

3、達，以發(fā)現(xiàn)SRNS患兒早期診斷的標(biāo)志物，盡快啟動更為合適的治療方案，及時和有效的控制病情，避免足量激素的無效使用和伴隨的藥物毒副作用，改善SRNS患兒的預(yù)后。方法:運用表面增強激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜儀(SELDI-TOF-MS)技術(shù)分析檢測結(jié)合在蛋白質(zhì)芯片上的尿液蛋白質(zhì)，獲得41例INS激素治療前尿液蛋白表達指紋圖譜，32例為SSNS，9例為SRNS，30例正常兒童尿液蛋白表達指紋圖譜，并用Biomarker Wizard和Biom

4、arker Patems System 5.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析，建立診斷模型。結(jié)果:在分子質(zhì)量/電荷比值(質(zhì)荷比，mass electron ratio，M/Z)為2000～20000范圍內(nèi)，SRNS組與SSNS組間有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)的蛋白質(zhì)峰有8個，5個蛋白質(zhì)峰在SRNS組高表達，M/Z分別是3067，5108，8122，11820，14356，3個蛋白質(zhì)峰在SSNS組高表達，M/Z分別是4011，4500，6703；

5、 SRNS組與正常對照組間有顯著差異的蛋白質(zhì)峰有13個，有12個蛋白質(zhì)峰在SRNS組高表達，M/Z分別是2100，2423，2636，3067，3399，4900，5108，6703，7012，8122，11820，14356，1個蛋白質(zhì)峰在正常對照組高表達，M/Z是5020；SSNS組和正常對照組間有顯著差異的蛋白質(zhì)峰有11個，有10個蛋白質(zhì)峰在SSNS組高表達，M/Z分別是2100，2423，2636，3399，4011，4500，

6、4900，6703，7012，7721，有1個蛋白質(zhì)峰在正常對照組高表達，M/Z是5020。用Biomarker wizard軟件對SRNS組和SSNS組尿液樣本的蛋白質(zhì)指紋圖進行比較，發(fā)現(xiàn)2個蛋白質(zhì)峰(11820，14356 M/Z)組合的診斷模型，可將SRNS與SSNS患兒準(zhǔn)確分組，靈敏度為82.98％，特異度為90.48％。在蛋白質(zhì)庫中搜索與上述M/Z值相對應(yīng)的蛋白質(zhì)，M/Z分別是2100，2636，3067，4500，5020的

7、蛋白質(zhì)在蛋白質(zhì)庫中未發(fā)現(xiàn)，可能為新蛋白質(zhì)。結(jié)論:1.激素耐藥型腎病綜合征患兒與激素敏感型腎病綜合征患兒相比，有8個蛋白質(zhì)峰顯著差異，它們M/Z分別是3067，4011，4500，5108，6703，8122，11820，14356，可能是SRNS患兒的尿液生物標(biāo)志物，其中3067，4500可能是新的蛋白質(zhì)。2.M/Z為11820,14356的蛋白質(zhì)組合的診斷模型診斷SRNS的靈敏度88.89％，特異度93.75％，診斷指數(shù)(DI)163

8、.46％，Youden指數(shù)73.46％，陽性預(yù)測值95.12％，陰性預(yù)測值70.37％，可將SRNS與SSNS患兒準(zhǔn)確分組。3.在激素耐藥型腎病綜合征患兒尿液中顯著高表達的蛋白質(zhì)可能為激素耐藥型腎病綜合征新藥開發(fā)提供耙標(biāo)。4.既在激素耐藥型腎病綜合征患兒尿液中表達，又在激素敏感型腎病綜合征患兒尿液中表達，而與正常對照比較有顯著差異的蛋白質(zhì)峰可能為腎病綜合征的標(biāo)志物，它們M/Z分別是2100，2423，2636，3399，4900，502