BMP-2-β-TCP-透明質酸鈉復合支架體內構建組織工程軟骨的實驗研究.pdf

1、目的： 探討以骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)/β-磷酸三鈣-透明質酸鈉(β-TCP-HA)復合支架在裸鼠體內構建組織工程軟骨的可行性。 方法： MSCs的分離和培養(yǎng)：拉頸處死2周齡實驗SD大鼠，酒精浸泡消毒后取雙側股骨和脛骨，1ml注射器吸取含15％FBS的L-DMEM培養(yǎng)液反復沖洗骨髓腔，將沖出的骨髓液離心后棄上清獲取細胞，經貼壁法提純擴增培養(yǎng)大鼠MSCs至第3代。 細胞支架的構建和實驗分組：分別構建

2、實驗組：rhBMP-2/β-TCP-HA、對照組：rhBMP-2/β-TCP及空白組：β-TCP復合支架。利用負壓吸引將MSCs種子細胞分別接種于支架內，并植于裸鼠皮下。 實驗觀察指標：術后12周大體觀察所獲組織工程軟骨的外觀；HE染色觀察各組軟骨細胞形態(tài)及分布；甲苯胺藍染色觀察各組軟骨細胞糖胺多糖(GAG)分泌情況；Ⅱ型膠原免疫組化染色觀察各組軟骨細胞膠原分泌。 結果： 大體標本觀察：實驗組組織工程軟骨體積較大

3、較厚，柔韌有彈性，表面光滑，白色有光澤；對照組組織工程軟骨體積稍小，表面欠平整，缺乏彈性；空白組移植物體積較小，表面粗糙，質地較硬脆。 HE染色結果：實驗組支架降解完全，軟骨細胞外基質豐富；對照組支架大部降解，支架內形成島狀軟骨增生；空白組支架部分降解，以纖維組織和脂肪組織為主，僅在支架邊緣見少量軟骨組織。 GAG及Ⅱ型膠原免疫組化染色結果：實驗組均呈強陽性；對照組GAG及Ⅱ型膠原免疫組化染色呈陽性；空白組GAG及Ⅱ型膠原免疫組