BMSCs-BMP-2-β-TCP-透明質(zhì)酸鈉復(fù)合支架構(gòu)建組織工程軟骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 探討以骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)/β-磷酸三鈣一透明質(zhì)酸鈉(β-TCP-HA)三維支架復(fù)合間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)在裸鼠體內(nèi)構(gòu)建組織工程軟骨的可行性。 方法： MSCs的分離和培養(yǎng)：拉頸處死2周齡實(shí)驗(yàn)SD大鼠，酒精浸泡消毒后取雙側(cè)股骨和脛骨，1ml注射器吸取含10％FBS的L-DMEM培養(yǎng)液反復(fù)沖洗骨髓腔，將沖出的骨髓液離心后棄上清獲取細(xì)胞，經(jīng)貼壁法提純擴(kuò)增培養(yǎng)大鼠MSCs至第3代。 細(xì)胞支

2、架的構(gòu)建和實(shí)驗(yàn)分組：分別構(gòu)建實(shí)驗(yàn)組：rhBMP-2/β-TCP-HA、對(duì)照組：rhBMP-2/β-TCP及空白組：β-TCP復(fù)合支架。利用負(fù)壓吸引將MSCs種子細(xì)胞分別接種于支架內(nèi)，并植于裸鼠皮下。 實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)：術(shù)后12周肉眼觀察所獲組織工程軟骨的外觀；HE染色觀察各組軟骨細(xì)胞形態(tài)及分布；甲苯胺藍(lán)染色觀察各組軟骨細(xì)胞糖胺多糖(GAG)分泌情況；Ⅱ型膠原免疫組化染色觀察各組軟骨細(xì)胞膠原分泌。 結(jié)果： 大體標(biāo)本觀察

3、：實(shí)驗(yàn)組組織工程軟骨體積較大較厚，柔韌有彈性，表面光滑，白色有光澤；對(duì)照組組織工程軟骨體積稍小，表面欠平整，缺乏彈性；空白組移植物體積較小，表面粗糙，質(zhì)地較硬脆。 HE染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組支架降解完全，軟骨細(xì)胞外基質(zhì)豐富；對(duì)照組支架大部降解，支架內(nèi)形成島狀軟骨增生；空白組支架部分降解，以纖維組織和脂肪組織為主，僅在支架邊緣見少量軟骨組織。 GAG及Ⅱ型膠原免疫組化染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組均呈強(qiáng)陽性；對(duì)照組GAG及Ⅱ型膠原免疫組化染色