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文檔簡介
1、目的:
觀察花生四烯酸對體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕(Hypertrophic Scar,HS)成纖維細(xì)胞(Fibroblast,F(xiàn)B)增殖的影響,并探討花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)在抑制人HS中FB增殖的可能作用機制。
方法:
?。?)HS組織取自本院燒傷科行瘢痕整形手術(shù)患者,采用改良組織塊聯(lián)合胰酶消化法培養(yǎng)FB,取第4代FB用于實驗;(2)倒置顯微鏡下觀察含不同濃度(0μmol/L、5μ
2、mol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)AA培養(yǎng)基培養(yǎng)一定時間FB的形態(tài)變化;(3)分別用含上述不同濃度AA的10%胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)FB24h、48h、72h后,CCK法檢測FB增殖活力;(4)制作FB爬片,免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測加入上述含不同濃度AA培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后FB核中Ki-67蛋白的表達情況。
結(jié)果:
?。?)組織塊接種后第6d見細(xì)胞游出,呈單個散在長梭形,第10d
3、組織塊周圍細(xì)胞明顯增多,第15d左右組織塊周圍細(xì)胞生長密集,開始相互融合。細(xì)胞傳代后7d左右基本長滿瓶底,培養(yǎng)瓶瓶底細(xì)胞呈毛刷狀、漩渦狀或放射狀生長,胞體呈長梭形,周圍可見長短不一的突起,細(xì)胞排列整齊規(guī)律(2)在一定濃度的AA作用下,F(xiàn)B的生長形態(tài)出現(xiàn)明顯變化。AA濃度為5μmol/L、10μmol/L時,F(xiàn)B細(xì)胞數(shù)量增加,細(xì)胞形態(tài)及生長走向未受到明顯影響;AA濃度為20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L時,F(xiàn)B的形狀開始
4、表現(xiàn)出不規(guī)整,細(xì)胞大小不均勻,形狀改變,部分細(xì)胞呈圓鈍形,數(shù)量減少,胞核濃縮。AA濃度越高,F(xiàn)B的形態(tài)改變表現(xiàn)越明顯。(3)FB在5μmol/L、10μmol/L濃度的AA作用下,F(xiàn)B存活率未受到明顯影響(p>0.05),20-80μmol/L AA濃度范圍內(nèi),F(xiàn)B隨著AA作用濃度或時間的增加其抑制率均逐步增加(P<0.05,且該濃度范圍內(nèi)各組間比較P<0.01)。(4)免疫細(xì)胞化學(xué)顯示AA濃度為20μmol/L、40μmol/L和80
5、μmol/L時,F(xiàn)B核中Ki-67蛋白表達陽性細(xì)胞百分率均顯著低于AA濃度為0μmol/L時(P<0.05),且AA濃度越高,Ki-67蛋白陽性細(xì)胞百分率越低(P<0.01);AA濃度為5μmol/L、10μmol/L時,Ki-67蛋白陽性細(xì)胞百分率低于AA濃度為0μmol/L時,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
一定濃度的AA能抑制人HSFB的增殖,使處于分裂期細(xì)胞數(shù)量減少,這可能為其抑制HS形成作用機制之
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