胰腺癌HIF-1和miR-185、miR-191、miR-212表達(dá)相關(guān)性及機制研究.pdf

1、分類號；R 7 3 5密 級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位√ 專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：10 0 6 2學(xué) 號：2 0 1 0 6 0 1 0 1 8學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又肄眚科袁母 T 封婚黼I 瓣瓣豢貉萋露鞠添鞲麟l V 嘲| 1 阿博士學(xué)位論文D o C T O R A L D I S S E R T A T I o N論文題目：胰腺癌H I F ．1 和m i R ．1 8 5 、m i R - 1 9 1 、m i l l ．2 1 2表達(dá)相關(guān)性及

2、機制研究T IT L E T h e e x p r e s s i v er e l e v a n c e a n d r e g u l a t o r y m e c h a n i s mo f H I F 一1a n d m i R ．1 8 5 、m i R 一1 9 1 、m i R - 2 1 2 i nt h ep a n c r e a t i cc a n c e r一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：腫瘤學(xué)論文作者：宋

3、振國指導(dǎo)教師：郝繼輝導(dǎo)師組成員：任賀天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科人學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要目的和內(nèi)容：H I F ．1 在腫瘤中調(diào)節(jié)多種靶基因的調(diào)控，其中包括部分微小R N A ( m i R ) 。用U C S C 基因組測覽器對胰腺癌中表達(dá)異常的m i R 結(jié)構(gòu)和啟動子序列進行分析，發(fā)現(xiàn)m i R ．1 8 5 、m i R ．1 9 1 、m i R ．2 1 2 等具有成為H I F ．1 下游靶點的結(jié)構(gòu)，前期實驗顯

4、示低氧時m i R 一1 8 5 、m i R 一1 9 1 、m i R ．2 1 2 表達(dá)升高。本課題通過對低氧條件下H I F 一1 和m i R 一1 8 5 、m i R 一1 9 1 、m i R ．2 1 2 表達(dá)相關(guān)性及調(diào)控機制的研究，進一步完善胰腺癌的低氧適應(yīng)和調(diào)控機制；對H I F 一1 和m i R 一1 8 5 、m i R 一1 9 1 、m i R 一2 1 2表達(dá)與臨床病理因素、病人預(yù)后的相關(guān)性進行分析，為

5、胰腺癌診治、評估預(yù)后提供新的思路。方法：1 ．胰腺癌細(xì)胞低氧時H I F ．1 和m i R ．1 8 5 、m i R ．1 9 1 、m i R ．2 1 2 表達(dá)：以體積分?jǐn)?shù)1 ％的氧氣培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞A s p c 一1 和M I AP a C a ．2 各6 、1 2 h ，以低氧o h 為對照，用w e s t e r n 檢測兩細(xì)胞系的H I F ．1 蛋白表達(dá)，R T - P C R 檢測兩細(xì)胞系的H I F ．1 m R

6、 N A 和m i R - 1 8 5 、m i R - 1 9 1 、m i R ．2 1 2 表達(dá)；2 ．H I F ．1 和m i R 一1 8 5 、m i R - 1 9 1 、m i R ．2 1 2 在胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)相關(guān)性：常氧時用H I F ．1 過表達(dá)質(zhì)粒和小干擾R N A 分別轉(zhuǎn)染A s p c ．1 和M I A P a C a ．2 細(xì)胞，上下調(diào)H I F ．1 表達(dá)，用w e s t e r n 法篩選H I

7、 F 一1 達(dá)預(yù)期效果的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，再用R T - P C R檢測H I F —l m R N A 和m i R 一1 8 5 、m i R 一1 9 1 、m i R 一2 1 2 的表達(dá)；3 ．H I F ．1 與m i R l 8 5 、m i R l 9 1 、m i R 2 1 2 啟動子的結(jié)合位點和調(diào)控機制：染色體免疫共沉淀技術(shù)分析H I F 一1 和m i R 一1 8 5 、m i R ．1 9 1 、m i R 一2 1

8、 2 的結(jié)合位點；質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染和雙熒光素酶分析法檢測H I F 一1 是否參與m i R ．1 8 5 、m i R ．1 9 1 、m i R - 2 1 2轉(zhuǎn)錄的上調(diào)表達(dá)。4 ．H I F ．1 與m i R 一1 8 5 、m i R 一1 9 1 、m i R ．2 1 2 在胰腺癌病人組織表達(dá)情況和與病人生存預(yù)后的關(guān)系：收集胰腺癌病人組織標(biāo)本，提取癌和正常胰腺組織R N A ，R T - P C R 法測定癌和正常胰腺組織的H