HIF-1α基因miR-199a靶序列區(qū)單核苷酸多態(tài)與胰腺癌發(fā)病預后關聯(lián)性研究.pdf

1、目的：
　　 胰腺癌是目前已知的惡性度最高、預后最差的實體瘤。盡管包括手術和放化療在內的治療手段取得了明顯的進展，但胰腺癌的預后并未獲得明顯改善，五年的存活率只有3％左右。乏氧是實體腫瘤普遍的生長微環(huán)境，乏氧狀態(tài)下腫瘤進展較快是臨床治療中所面臨的難題。低氧誘導因子-1(hypoxiainduciblefactor1，HIF-1)是參與腫瘤乏氧的一個重要的調控因子，由α亞單位和β亞單位構成的異源二聚體，轉入細胞核內，參與細胞增殖、

2、糖代謝、細胞存活等多種生理功能。臨床病理學資料顯示，約70％胰腺導管腺癌組織高表達HIF-1。最近研究報道了HIF-1α序列中rs2057482基因多態(tài)性影響腎細胞癌的預后，并且通過影響Wnt信號通路參與結腸癌的遺傳易感。但其與胰腺癌的關系尚未有人報道。而近年來，HIF-1α在胰腺癌的形成、進展過程中發(fā)揮的作用引起了廣泛關注，本研究旨在探討HIF-1α基因多態(tài)性和胰腺癌發(fā)病預后的關系，以及HIF-1α基因多態(tài)性在miRNA調控HIF-1

3、α中的作用，為胰腺癌患者的早期診斷和治療提供新的途徑和靶點。
　　 方法：
　　 1.樣本的納入及采集
　　 采用以醫(yī)院為基礎的病例-對照研究方法，以291例胰腺癌患者和247例正常對照為研究對象。病例組為2001年至2012年在天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院住院的經細胞學證實為胰腺癌的患者;對照為同時期在天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院進行體檢的247位正常居民。
　　 2.目的基因的采集、擴增、測序及免疫組化

4、>　　 采集病例和正常對照人群的靜脈血及部分病例組石蠟組織，DNA的抽提采用DNA提取試劑盒。應用聚合酶鏈反應(PCR)和基因測序技術對各樣本rs2057482多態(tài)位點基因型進行鑒定。并收集150例胰腺癌石蠟組織切片，用免疫組織化學方法分析rs2057482位點基因型分布與HIF-1α基因表達的相關性。
　　 3.細胞功能學實驗驗證
　　 miR-199a靶序列的3'非翻譯區(qū)野生型和突變型熒光素酶報告基因載體，與miR

5、-199amimic/mimiccontrol共轉染HEK-293T和胰腺癌細胞系，檢測兩種載體中熒光素酶的表達差異。
　　 4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計
　　 研究對象基因型與Hardy-Weinberg平衡的符合程度、組間基因型與等位基因頻率的比較采用雙側）x2檢驗，采用非條件Logistic回歸模型對胰腺癌的危險因素進行單因素和多因素分析，估計比值比(OR)及其95％置信區(qū)間(CI)。用Kaplan-Meier方法進行生存分析，不

6、同基因型之間生存率差異通過log-rank檢驗。
　　 結果：
　　 1.HIF-1α基因中rs2057482位點的CC基因型頻率病例組顯著高于對照組(73.5％vs61.9％，P＜0.01)。logistic回歸分析結果顯示:CC基因型可增加胰腺癌的患病風險(OR=2.156,95％CI:1.324-3.511,P＜0.05)。
　　 2.Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)124例胰腺癌中CC基因型患者生存時

7、間（14.0±2.1月）明顯低于CT基因型患者（25.2±6.3月，P=0.01）。臨床病理學分析發(fā)現(xiàn)淋巴結轉移情況與該SNP位點的改變相關。
　　 3.雙熒光素酶實驗證實miR-199a靶向結合于HIF-1α3'UTR區(qū)，且與CC基因型相比，miR-199a顯著下調CT基因型的熒光素酶活性(P＜0.01)。
　　 結論：
　　 HIF-1α基因miR-199a靶序列區(qū)基因多態(tài)性和胰腺癌易感性和預后密切相關，為胰