植物內(nèi)源小RNA隨機(jī)過表達(dá)體系的建立.pdf

1、小RNA是真核生物中一類非常保守的生長發(fā)育調(diào)節(jié)分子，對(duì)植物的器官發(fā)生、極性生長、細(xì)胞增殖、組織分化以及抵抗外界不良環(huán)境等方面都具有重要的調(diào)控作用。擬南芥作為第一個(gè)被完成基因組測(cè)序的開花植物，由于其基因組緊湊、生育期短、易于人工培養(yǎng)和遺傳操作等特點(diǎn)，成為單子葉、雙子葉植物基因功能和生長發(fā)育研究的理想模式材料。擬南芥基因組中具有大量的小RNA，研究這些小RNA的生物學(xué)功能對(duì)了解植物發(fā)育和分子育種至關(guān)重要。目前雖然可以通過人工微小RNA及合成

2、小RNA技術(shù)對(duì)特定小RNA進(jìn)行過量表達(dá)，但這些技術(shù)每次只能對(duì)單一小RNA分子進(jìn)行遺傳操作，這嚴(yán)重限制了對(duì)大量植物內(nèi)源小RNA的功能研究和應(yīng)用。本研究通過對(duì)本實(shí)驗(yàn)室原有的tasiRNA表達(dá)載體進(jìn)行改造，建立一種新的功能基因組學(xué)研究系統(tǒng)，將擬南芥內(nèi)各種不同小RNA隨機(jī)過量表達(dá);并通過構(gòu)建小RNA過表達(dá)突變體庫，對(duì)各種小RNA的生物學(xué)功能、作用機(jī)制和靶基因進(jìn)行研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴在原有tasiRNA表達(dá)載體pRDE-0的基

3、礎(chǔ)上，將pRDE-0的35S啟動(dòng)子35s替換成玉米Ubi啟動(dòng)子，構(gòu)建新的tasiRNA表達(dá)載體pRDE。⑵通過合成三個(gè)報(bào)告基因CHLORINA42（Ch42）、Trich、 FLOWERING LOCUST(Ft)的寡聚核苷酸鏈，退火形成DNA雙鏈，與酶切后載體pRDE連接，構(gòu)建成三個(gè)含報(bào)告基因的載體:pRDE-Ch42、pRDE-Trich、pRDE-Ft,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥，篩選出pRDE-Ch42、pRDE-Tr