三疣梭子蟹EcR基因在蛻皮和卵巢發(fā)育過程中的表達分析.pdf

1、為了研究蛻皮激素受體（EcR）在甲殼動物生長和生殖過程中的作用，采用反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）和 cDNA末端快速擴增（RACE）技術(shù)，克隆得到了三疣梭子蟹Portunus trituberculatus蛻皮激素受體（PtEcR）的全長cDNA序列（GenBank登錄號：KC354381），運用實時熒光定量 PCR（qRT-PCR）方法，分析該基因在不同組織、蛻皮時期和卵巢發(fā)育階段的表達特征。結(jié)果表明，PtEcR cDNA全長2231

2、bp，包含一個206bp的5’非編碼區(qū)、一個756bp的3’非編碼區(qū)，和一個1269bp的開放閱讀框（ORF），共編碼422個氨基酸。推導的PtEcR氨基酸序列與已公布的其他甲殼動物EcR進行比對，發(fā)現(xiàn)一致性為67％-97%，其與凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）一致性最低，為67%；與擬穴青蟹（Scylla paramamosain）EcR氨基酸序列一致性最高，與其三種亞型的一致性分別為95%、95%和97%。系統(tǒng)

3、進化樹分析 PtEcR與其它甲殼動物 EcR聚為一支，而昆蟲 EcR聚為另一支。PtEcR在檢測的10個三疣梭子蟹組織（表皮，性腺，肝胰腺，眼柄，大顎器，Y-器，胸神經(jīng)節(jié)，心臟，肌肉）中均有表達，其中在 Y-器（YO）表達量最高。在蛻皮周期中，自蛻皮后期至蛻皮前期 D2亞期PtEcR在 YO中的表達量一直較低；至蛻皮前期 D3亞期和 D4亞期，PtEcR表達量顯著升高，這與血淋巴中20-羥基蛻皮酮（20E）濃度在 D3/D4亞期顯著升高