三疣梭子蟹RXR基因在蛻皮和卵巢發(fā)育過程中的表達(dá)分析.pdf

1、為了研究維甲酸類X受體(retinoid X receptor,RXR)基因在甲殼動(dòng)物蛻皮和卵巢發(fā)育中的作用，本研究首先通過反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆獲得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)RXR基因(PtRXR)全長cDNA序列。序列分析表明：PtRXR cDNA全長1365 bp，包含25 bp的5’末端非編碼區(qū)(UTR)，1140 bp的開放閱讀框(ORF)，以

2、及200 bp的3’UTR，該基因可編碼379個(gè)氨基酸。PtRXR氨基酸序列包含從N端的A/B域(轉(zhuǎn)錄激活域)到C端的E域(配體結(jié)合域)4個(gè)核受體特征結(jié)構(gòu)域。經(jīng)氨基酸序列比對(duì)可知，PtRXR與其他已知甲殼動(dòng)物的RXR氨基酸序列高度同源。系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示，PtRXR與其他甲殼動(dòng)物RXR聚在一起，并且與脊椎動(dòng)物RXR的親緣關(guān)系要近于昆蟲的超氣門蛋白(ultraspiracleprotein, USP)。本研究運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-P

3、CR)方法檢測PtRXR的組織分布特性和在蛻皮、卵巢發(fā)育過程中的表達(dá)特征。組織分布研究顯示，PtRXR廣泛存在于所檢測的三疣梭子蟹組織，且高表達(dá)于卵巢和Y-器。蛻皮過程中，PtRXR在Y-器和大顎器中的表達(dá)量從蛻皮間期C期開始下降，在整個(gè)蛻皮前期維持較低水平，蛻皮完成后上升到較高水平，表明PtRXR在三疣梭子蟹蛻皮過程中起著重要的作用。卵巢發(fā)育過程中，PtRXR在所檢測的卵巢、肝胰腺、Y-器和大顎器中都有表達(dá)，一次卵巢發(fā)育中，卵巢和肝胰

4、腺的PtRXR表達(dá)量從卵巢發(fā)育初期開始逐漸上升，當(dāng)卵巢進(jìn)入發(fā)育快速期(Ⅲ期)和發(fā)育旺盛期(Ⅳ期)時(shí)達(dá)到較高值，成熟時(shí)期(Ⅴ期)突然下降；Y-器中的表達(dá)量峰值出現(xiàn)在發(fā)育快速期(Ⅲ期)，在卵巢發(fā)育旺盛期(Ⅳ期)和成熟期(Ⅴ期)較低；大顎器中的表達(dá)量變化差異則不是很明顯。二次卵巢發(fā)育中，4個(gè)組織的PtRXR表達(dá)量隨著卵巢的成熟逐漸上升，并且在卵巢發(fā)育接近成熟時(shí)期達(dá)到最大值。這表明PtRXR與三疣梭子蟹的卵巢發(fā)育密切相關(guān)，可能參與卵巢發(fā)育的卵黃