骨痹康方對(duì)IL-1α誘導(dǎo)的人軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)及WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響研究.pdf

1、目的：探討中醫(yī)學(xué)對(duì)“骨痹”發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)，揭示驗(yàn)方“骨痹康”方對(duì)IL-1α誘導(dǎo)的人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞損傷模型Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)的調(diào)控機(jī)制和對(duì)軟骨細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制；通過(guò)隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)評(píng)價(jià)“骨痹康”方治療膝OA的有效性和安全性，為其防治骨關(guān)節(jié)炎提供可靠的理論依據(jù)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和臨床循證證據(jù)。 方法：1理論研究方法：采用文獻(xiàn)學(xué)、邏輯推理、比類取象等方法，對(duì)OA發(fā)病機(jī)理的中醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)進(jìn)行探討。2 實(shí)驗(yàn)方法：(1)取材手術(shù)后人關(guān)節(jié)軟骨，培養(yǎng)軟骨細(xì)

2、胞；(2)MTT比色法觀察骨痹康對(duì)正常和IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞增殖的影響； (3)RT-PCR法觀察骨痹康對(duì)IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)的影響；(4)免疫組織化學(xué)法觀察骨痹康對(duì)IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)的影響。3 臨床研究方法：采用隨機(jī)平行對(duì)照的試驗(yàn)方法，入選病例隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。試驗(yàn)組給予骨痹康水煎劑每日一劑，對(duì)照組給予維骨力2粒，每日3次，療程4周。治療前后兩組分別評(píng)價(jià)其WOMAC指數(shù)、中醫(yī)證候

3、改善情況、關(guān)節(jié)壓痛改善情況、關(guān)節(jié)腫脹改善情況、關(guān)節(jié)活動(dòng)度的改善情況、起效時(shí)間、合用泰諾林的粒數(shù)和時(shí)間、不良反應(yīng)、實(shí)驗(yàn)室安全指標(biāo)的檢測(cè)情況。 結(jié)果：1 理論研究結(jié)果：根據(jù)導(dǎo)師張前德教授的學(xué)術(shù)思想，骨關(guān)節(jié)炎根本病機(jī)為“腎虛絡(luò)痹”即肝腎虧虛、痰瘀阻絡(luò)，病變部位在關(guān)節(jié)絡(luò)脈，不外絡(luò)虛、絡(luò)實(shí)，絡(luò)虛是肝腎不足、氣血虧虛、絡(luò)脈失養(yǎng)；絡(luò)實(shí)是痰瘀互結(jié)、邪滯絡(luò)脈。其中絡(luò)虛為始動(dòng)因素，絡(luò)脈瘀滯為其病變形成的最終病理基礎(chǔ)。臨床治療骨關(guān)節(jié)炎應(yīng)考慮其臨床癥

4、狀和發(fā)病特點(diǎn)，在辨證的基礎(chǔ)上，注重“補(bǔ)腎通絡(luò)”。2 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果：(1)成功培養(yǎng)取材于6例患者關(guān)節(jié)術(shù)后軟骨的軟骨細(xì)胞；(2)MTT比色法觀察骨痹康對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果顯示：骨痹康0.0750mg/mL、0.3750mg/mL、0.7500mg/mL三個(gè)濃度均可顯著促進(jìn)正常和IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞的增殖，療效呈劑量依賴性；(3)RT—PcR結(jié)果：所有標(biāo)本的mRNA擴(kuò)增產(chǎn)物中都能看到預(yù)期長(zhǎng)度的Ⅱ型膠原特異性條帶，IL-1α誘導(dǎo)的軟骨

5、細(xì)胞較正常軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)減弱；骨痹康0.7500mg/mL藥物濃度可顯著上調(diào)IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原mRNA表達(dá)；(4)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：各組標(biāo)本均可見(jiàn)Ⅱ型膠原表達(dá)，表達(dá)部位為胞漿，可見(jiàn)棕黃色顆粒。IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞較正常軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)減弱；中藥骨痹康0.3750mg/mL和0.7500mg／mL藥物濃度均可促使IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)增強(qiáng)。3 臨床研究結(jié)果：總體療效評(píng)價(jià)試驗(yàn)組總有效率9

6、3.33％,優(yōu)于對(duì)照組70％；試驗(yàn)組和對(duì)照組治療后WOMAC總指數(shù)以及疼痛、功能均較治療前明顯下降，有顯著差異(P<0.05～0.01)，僵硬無(wú)顯著性變化；治療后兩組WOMAC總指數(shù)和功能對(duì)比，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，兩藥在改蓋WOMAC總指數(shù)和功能方面效果相當(dāng)：試驗(yàn)組和對(duì)照組疼痛改善情況比較，對(duì)照組的效果更好，有顯著差異(P＜0.05)；骨痹康方治療后能明顯降低疼痛指數(shù)，改善關(guān)節(jié)壓痛、腫脹和腰膝酸軟，效果較維骨力為好；骨痹康起效

7、較維骨力快；與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組合用泰諾林的人數(shù)和總量均較少；兩組均未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。 結(jié)論：骨痹康方對(duì)正常的和IL-1α誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞損傷模型有良好的促進(jìn)增殖的作用，且成劑量依賴性；在轉(zhuǎn)錄水平有效阻止了IL-1為首的細(xì)胞因子對(duì)軟骨的損傷效應(yīng)，具有促進(jìn)軟骨細(xì)胞合成代謝的某種/某些有效成分，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平促進(jìn)軟骨細(xì)胞的正常合成代謝，維持軟骨細(xì)胞正常Ⅱ型膠原表型的表達(dá)，對(duì)軟骨具有保護(hù)作用；能改善膝骨關(guān)節(jié)炎患者的臨床癥狀和體征，安全，