電針治療對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨IL-1β表達的影響.pdf

1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種常見的中老年人多發(fā)疾病,以關(guān)節(jié)軟骨進行性變性和破壞及骨贅形成為病理特點,軟骨中IL-1β被認為在OA發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。IL-1β是IL-1家族成員之一,IL-1β通過與軟骨細胞膜上IL-1RI及IL-1R輔助蛋白(IL-1RAcP)結(jié)合形成受體復合物, IL-1RI與IL-1RAcP在細胞域間異二聚化,通過第二信使(cAMP、GTP)等信息傳遞系統(tǒng),激活I(lǐng)L-1信號轉(zhuǎn)導。

2、在正常軟骨中和正常的滑膜組織細胞IL-1β量很少,但在OA軟骨中則有較高水平的表達。膝關(guān)節(jié)周圍分布了很多穴位,通過電針對它們的刺激,能有效促進機體對內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)的釋放,起到明顯緩解疼痛的作用,同時促進血液循環(huán),疏通經(jīng)脈,利于關(guān)節(jié)軟骨再生修復和周圍組織滲液的吸收。本課題通過觀察電針治療對兔膝OA的軟骨大體形態(tài)變化、軟骨細胞病理改變,以及對軟骨IL-1β表達的影響,探討電針對兔膝OA模型軟骨細胞修復的影響及作用機制。方法:(1)對象和干預

3、措施:健康新西蘭大白兔(雄性)60只,隨機抽取20只為正常對照組,不造模,其余40只兔隨機分為模型組20只和電針治療組20只。模型組和電針治療組均采用伸直位管型石膏固定左膝關(guān)節(jié),上至腹股溝平面下1.5CM,下至踝關(guān)節(jié)下3CM,建立OA模型,正常對照組和模型組于喂養(yǎng)6w后采用空氣栓塞法處死,切開左膝關(guān)節(jié),取內(nèi)側(cè)髁軟骨觀察造模后相關(guān)指標變化,治療組在進行電針治療15d后以同樣方法觀察治療后相關(guān)指標改變情況。電針治療分別選取兔左下肢內(nèi)膝眼,外

4、膝眼,足三里,梁丘五個穴位,每天固定時間進行上述穴位電針治療25分鐘,持續(xù)治療15天。(2)觀察指標:①切取實驗兔左膝關(guān)節(jié),肉眼觀察各組關(guān)節(jié)軟骨的形態(tài)變化。②選取股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨作為標本,固定,包埋,切片,分別行HE染色及甲苯胺藍染色,對照Mankin’s評分標準進行分析。③免疫組織化學分析:用兔抗IL-1β試劑盒對IL-1β在關(guān)節(jié)軟骨中的表達變化進行檢測.(3)統(tǒng)計學處理:用SPSS16.0 for WINDOWS進行統(tǒng)計學分析。所得數(shù)

5、值結(jié)果采用x±s表示,以P<0.05為有統(tǒng)計學差異,P<0.01有顯著性差異。結(jié)果:(1)軟骨大體觀察:正常對照組左膝關(guān)節(jié)無明顯關(guān)節(jié)積液,外觀軟骨面光滑呈蘭白色,色深明亮,無裂紋,軟骨結(jié)構(gòu)Mankin’s評分為0分。模型組出現(xiàn)異常關(guān)節(jié)積液,此時關(guān)節(jié)面多出現(xiàn)粗糙糜爛,并且色澤暗淡,呈灰黃色,表面凹凸不平;電針治療組關(guān)節(jié)軟骨改變呈粗糙,很少出現(xiàn)糜爛,并且粗糙程度輕微,大部分可出現(xiàn)關(guān)節(jié)腔積液和滑膜增生大部分動物出現(xiàn)關(guān)節(jié)積液,同時表現(xiàn)滑膜增生;

6、模型組與電針治療組均嚴格參照Mankin’s評分,具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。(2)HE染色光鏡觀察軟骨細胞形態(tài):正常對照組軟骨光滑,厚薄均勻,軟骨細胞形態(tài)一致,大小相同,有序排列,潮線也同樣表現(xiàn)完整;模型組軟骨表層糜爛變色,厚度較正常組明顯變薄,細胞數(shù)目減少,形態(tài)不規(guī)整,大小不均一,潮線出現(xiàn)明顯紊亂;電針治療組軟骨表面相對較均勻整齊,厚度稍微增厚,軟骨細胞形態(tài)大部分比較規(guī)整,少數(shù)出現(xiàn)紊亂,但程度較輕,潮線也同樣大部分完整,少許出現(xiàn)

7、紊亂。(3)甲苯胺藍染色病理學觀察蛋白多糖和膠原等基質(zhì)變化:正常組染色均勻,基質(zhì)無失染;模型組染色明顯變淺,且極不均勻,基質(zhì)明顯失染;治療組染色輕度減退,基質(zhì)少許失染。按Mankin’s評分正常對照組與模型組、模型組與電針治療組間比較,差異均有顯著性(P<0.01)。(4)軟骨免疫組化IL-1β測定情況:正常對照組僅表層軟骨細胞內(nèi)偶見IL-1β弱陽性表達,為胞質(zhì)內(nèi)少許黃褐色顆粒;模型組的軟骨基質(zhì)、胞漿中均有IL-1β表達,全層可見,尤以

8、中層密度最高,成熟軟骨細胞中較多,為深黃褐色顆粒;電針治療組中,軟骨表層可見散在的軟骨細胞胞漿中存在IL-1β表達,為淺黃褐色顆粒。正常對照組與模型組、模型組與電針治療組間比較,差異均有顯著意義(P<0.01)。結(jié)論:(1)采用伸直位管型石膏固定法制作兔膝OA模型能較好地模擬OA的發(fā)病過程,本實驗中造模成功。(2)IL-1β具有促進關(guān)節(jié)軟骨細胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)降解的作用,對加重軟骨損傷、破壞有