組織工程化骨骼肌種子細胞存活率的實驗研究.pdf

1、種子細胞是組織工程研究的一個重要組成部分，種子細胞的獲得非常重要，成肌細胞可以從骨骼肌培養(yǎng)、純化而來，也可以誘導骨髓間充質干細胞而獲得。本實驗通過比較兩種不同組織來源培養(yǎng)的骨骼肌成肌細胞的存活率，希望為組織工程化骨骼肌種子細胞的選擇提供參考依據(jù)，為種子細胞的培養(yǎng)提供一種更優(yōu)化的方法。 方法：采用胰蛋白酶消化法對出生1天內的SD雄性大鼠乳鼠成肌細胞的體外原代培養(yǎng)、純化，傳代與鑒定，取第3代成肌細胞，常規(guī)制成細胞懸液，以1×10<'

2、5>/ml的細胞密度接種到24孔板和96孔板。每1，3，5，7，9d分別從24孔板中隨機取出5個孔和從96孔板中隨機取出10個孔的細胞，將取出的5孔細胞置于細胞活力分析儀進行細胞存活率的測定。同時將10孔的細胞行MTT法檢測細胞生長活力，測1，3，5，7，9d的OD值。用細胞存活率的平均值和OD值繪制細胞生長曲線，了解細胞生長情況。 體外原代培養(yǎng)4周齡SD雄性大鼠的骨髓間充質干細胞(MSCs)，當傳至第2代時，以含5-AzalO

3、μmol/L的誘導培養(yǎng)基行誘導培養(yǎng)。誘導14天后，取傳代至第3代的成肌細胞，常規(guī)制成細胞懸液，以1×10<'5>/ml的細胞密度接種到24孔板和96孔板。每1，3，5，7，9d分別從24孔板中隨機取出5個孔和從96孔板中隨機取出10個孔的細胞，將取出的5孔細胞置于細胞活力分析儀進行細胞存活率的測定。同時將10孔的細胞行MTT法檢測細胞生長活力，測1，3，5，7，9d的OD值。用細胞存活率的平均值和OD值繪制細胞生長曲線，了解細胞生長情況

4、。 結果：本實驗所用的兩種培養(yǎng)成肌細胞的方法均能達到5×10<'5>-7×10<'6>/ml的密度，ld-3d和5d-7d進入倍增期，3d-5d進入平臺期，第7d達到高峰，7d-9d為衰減期，后很快死亡。從骨骼肌中培養(yǎng)的成肌細胞，MTT法7d的oD值最高為0.8153，細胞活力分析儀測定的細胞存活率7d時也最高為92.06[％]，成肌細胞的平均直徑為9.07μm，最大為9.87μm，最小為8.26μm：采用骨髓問充質干細胞培養(yǎng)后

5、經5-Aza誘導所得到的成肌細胞，MTT法7d的OD值最高為0.6358，細胞活力分析儀測定的細胞存活率7d時也最高為67.77[％]，成肌細胞的平均直徑為9.17μm，最大為10.27μm，最小為7.97μm。結論：從骨骼肌中培養(yǎng)的成肌細胞的存活率明顯高于骨髓間充質干細胞培養(yǎng)后經5_hza誘導所得到的成肌細胞存活率，差異有統(tǒng)計學意(p<0．05)，證明直接從骨骼肌來源的成肌細胞更適合作為組織工程化骨骼肌的種子細胞來源。而兩種不同組織來