洛鉑對(duì)人宮頸癌CaSki細(xì)胞生長(zhǎng)影響的機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討洛鉑對(duì)宮頸癌 CaSki細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋亡的影響以及洛鉑作用宮頸癌細(xì)胞前后蛋白質(zhì)組的變化。
　　方法：1.體外培養(yǎng)CaSki細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宮頸癌CaSki細(xì)胞，分為陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(加入不同濃度洛鉑:2、4、6、8、12、16、24和32μg/ml)，作用24、48、72小時(shí)，進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)。
　　2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宮頸癌CaSki細(xì)胞，分為陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（加入不同濃度洛鉑:2、6和12μg/ml

2、），作用24、48、72小時(shí)，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)洛鉑對(duì)宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用。
　　3.6?g/ml洛鉑作用細(xì)胞48h，分別收集洛鉑處理組與對(duì)照組細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白并運(yùn)用雙向凝膠電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)，PDOuest軟件分析洛鉑處理前后差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，選取明顯表達(dá)差異在兩倍以上的11個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，運(yùn)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)分析鑒定蛋白質(zhì)樣品。
　　結(jié)果1.

3、洛鉑能夠抑制宮頸癌CaSki細(xì)胞的增殖，呈濃度和時(shí)間依賴。
　　2.洛鉑能夠誘導(dǎo)宮頸癌CaSki細(xì)胞凋亡，呈濃度和時(shí)間依賴；倒置顯微鏡下可見(jiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變，流式細(xì)胞檢測(cè)示洛鉑低濃度短時(shí)間作用使細(xì)胞周期阻滯在S期，高濃度長(zhǎng)時(shí)間作用使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。
　　3.經(jīng)雙向凝膠電泳和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析后，成功鑒定了11個(gè)蛋白質(zhì)，包括泛素羧基末端水解酶16、不均一核糖核蛋白 A2/B1、多聚嘧啶結(jié)合蛋白、核糖磷酸焦磷