2005年、2006年江蘇地區(qū)豬高熱病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的多重PCR檢測(cè)及PRRSV分離株部分基因序列分析.pdf

1、根據(jù)GenBank中已發(fā)表的序列，設(shè)計(jì)針對(duì)豬偽狂犬病病毒TK基因和豬細(xì)小病毒VP2基因的特異性引物，參考有關(guān)文獻(xiàn)得到擴(kuò)增豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的引物，建立針對(duì)上述三種病毒的多重PCR方法，可在一次PCR反應(yīng)中擴(kuò)增出相應(yīng)的277bp,511bp和404bp的目的片段。同時(shí)，針對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5基因和豬瘟病毒NS5A基因，設(shè)計(jì)特異性引物，建立針對(duì)上述兩種RNA病毒的多重RT-PCR方法，可同時(shí)擴(kuò)增出相應(yīng)的876bp和465

2、bp的目的片段。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這兩個(gè)多重PCR方法特異、敏感、快速，具有廣闊的應(yīng)用前景。 應(yīng)用上述兩個(gè)多重PCR方法，對(duì)來自江蘇地區(qū)的211份豬高熱病病料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示93份病料為PCV2陽(yáng)性，陽(yáng)性率為44.1％；8份病料為PPV陽(yáng)性，陽(yáng)性率為3.9％；5份病料為PRV陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.4％；108份病料為PRRSV陽(yáng)性，陽(yáng)性率為51.2％；22份病料為HCV陽(yáng)性，陽(yáng)性率為10.4％。其中，混合感染PCV2、PRRSV和HCV

3、的病料有11份，占病料總數(shù)的5.4％；混合感染PCV2、PRRSV和PRV的病料有1份，占總數(shù)的0.5％；混合感染PCV2和PRRSV的病料有54份，占總數(shù)的25.6％；混合感染PRRSV和HCV的病料有5份，占病料總數(shù)的2.4％；混合感染PCV2和HCV的病料有4份，占總數(shù)的1.9％；混合感染PCV2和PPV的病料有7份，占總數(shù)的3.4％；混合感染PCV2和PRV的病料有2份，占總數(shù)的1.0％；混合感染HCV和PRV的病料有1份，占總

4、數(shù)的0.5％。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，2005年病料中PCV2的陽(yáng)性率為21.2％，2006年為73.2％：2005年P(guān)RRSV的陽(yáng)性率為38.1％，2006年為67.7％，這兩種病毒的陽(yáng)性率上升明顯，而另外3種病毒的陽(yáng)性率變化不大。通過流行病學(xué)調(diào)查，表明PRRS和PCVD在江蘇地區(qū)呈流行趨勢(shì)，混合感染多發(fā)。 對(duì)05年、06年分離于江蘇地區(qū)的PRRSV毒株的ORF5基因測(cè)序。結(jié)果表明，所有毒株ORF5基因大小均為603bp。將本試驗(yàn)所分離

5、的毒株與國(guó)外美洲型毒株相比，發(fā)現(xiàn)ORF5序列同源性為84.5％-92.2％，而與國(guó)內(nèi)毒株的同源性為96.8％-99.8％，與歐洲型毒株之間的同源性比較低，為59.8％-61.8％。05年、06年江蘇地區(qū)PRRSV分離株ORF5基因間的同源性為96.9％-99.8％。同時(shí)將2005年、2006年分離到的各3個(gè)毒株Nsp2部分核苷酸序列與GenBank中已發(fā)表序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)2006年分離到PRRSV Nsp2核苷酸序列都有87個(gè)堿基的缺