PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV復(fù)合PCR檢測技術(shù)的建立和初步應(yīng)用.pdf

1、豬繁殖障礙病在國內(nèi)外都有嚴(yán)重發(fā)生，已成為大中型豬場最重要的疫病之一，并且呈全球性分布。我國當(dāng)前以豬圓環(huán)病毒2型感染、豬細(xì)小病毒病、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟造成的豬繁殖障礙最為普遍和嚴(yán)重，特別是這幾種病原常混合感染，可以引起70％以上的初產(chǎn)母豬發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱仔，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 本研究針對豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRS

2、V)和豬瘟病毒(CSFV)5種病原，建立復(fù)合PCR檢測技術(shù)，并用該法對山東省膠東地區(qū)的豬場進(jìn)行檢測，從而了解該地區(qū)豬繁殖障礙病的發(fā)病情況，為豬場制定合理的免疫程序提供參考。
　　 根據(jù)Genbank上PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV的已知序列，分別設(shè)計并合成了5對特異性擴(kuò)增引物，建立PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV單項PCR檢測方法，分別擴(kuò)增出預(yù)期的466 bp、759 bp、349 bp、202 b

3、p和707bp片段。對單項PCR反應(yīng)條件（引物濃度、dNTP濃度、TaqDNA聚合酶濃度、退火溫度和PCR反應(yīng)程序）進(jìn)行優(yōu)化，篩選出最佳反應(yīng)條件。
　　 在優(yōu)化單項PCR反應(yīng)條件基礎(chǔ)上，建立了PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV復(fù)合PCR檢測方法，并對其特異性、敏感性和重復(fù)性進(jìn)行了測定。結(jié)果表明:只有特異性引物與其特異性模板能擴(kuò)增出預(yù)期大小的條帶，與其它模扳沒有任何擴(kuò)增產(chǎn)物，表明該法特異性好;最低能檢測到184pg/L

4、的PCV2、248pg/L的PPV、5.3ng/L的PRV、25.6ng/L的PRRSV、15.28ng/L的CSFV的核酸模板，表明該法具有較高的敏感性;重復(fù)檢測3次，其結(jié)果均一致，表明重復(fù)性好。
　　 采用建立的PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV復(fù)合PCR檢測方法，對山東省膠東地區(qū)送檢的32份臨床疑似病料進(jìn)行了PCR檢測，結(jié)果表明:32份樣品中，PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的陽性率分別為25