2007年江蘇地區(qū)豬高熱病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV、CSFV、JEV、EMCV、PEV、PTV的檢測和區(qū)分豬瘟野毒、疫苗毒熒光定量RT-PCR方法的嘗試.pdf

1、根據(jù)GenBank中已發(fā)表的序列，設(shè)計(jì)針對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcinereproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)Nsp2基因和豬瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)5'-NCR的特異性引物，建立針對(duì)上述兩種RNA病毒的多重RT-PCR方法，可同時(shí)擴(kuò)增出相應(yīng)的743 bp和288 bp的目的片段，并且針對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的引物能

2、夠區(qū)分PRRSV是否為缺失株，若為缺失株，擴(kuò)增片段小于743 bp。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此多重RT-PCR方法特異、敏感、快速，具有廣闊的應(yīng)用前景。 同時(shí)根據(jù)GenBank中已發(fā)表的序列，設(shè)計(jì)了針對(duì)腦心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus，EMCV)和日本乙型腦炎病毒(Japanese encephaliftsvirus，JEV)的保守區(qū)域的特異性引物，分別擴(kuò)增出284 bp和1057 bp的目的片段。參照有關(guān)

3、文獻(xiàn)，采用nRT-PCR的方法檢測豬腸病毒(porcine enterovirus，PEV)和豬捷申病毒(porcine teschovirus，PTV)，根據(jù)GenBank中已發(fā)表的PEV和PTV的血清型序列，針對(duì)豬捷申病毒PTV-1～PTV11、豬腸病毒PEVB的5'-NTR或腸病毒PEVA的3D聚合酶基因，采用三套引物，通過nRT-PCR的方法能夠檢出所有PEV和PTV的血清型的病毒，擴(kuò)增的片段分別為158bp、221bp和313

4、bp。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明上述PCR方法特異、敏感、快速，具有廣闊的應(yīng)用前景。 應(yīng)用上述PCR方法以及本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立的檢測豬圓環(huán)病毒2型(porcinecirvovirus type 2，PCV2)、豬細(xì)小病毒(porcine parvovirus，PPV)和豬偽狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus，PRV)的多重PCR方法，對(duì)來自江蘇地區(qū)的141份豬高熱病病料進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示6l份病料為PCV2陽性，陽

5、性率為43.3％；96份病料為PRRSV陽性，陽性率為68.1％；69份病料為CSFV陽性，陽性率為48.9％；67份病料為PTv陽性，陽性率為47.5％；34份病料為PEVB陽性，陽性率為24.1％；9份病料為EMCV陽性，陽性率為6.4％；PPV、PRV、厄V、PEVA均未為檢出；其中PCV2、PRRSV混合感染陽性率最高，141份病料中有52份，占總數(shù)的36.9％，且有12份為PRRSV、PCV2和CSFV的三重混合感染，占總數(shù)的

6、8.5％，同時(shí)，PCV2、PRRSV、PTV的混合感染有8份，占總數(shù)的5.7％；在混合感染病例中，PRRSV和CSFV混合感染居第二，14l份病料中有41份，占總數(shù)的29％，PRRSV和PTV的混合感染為第三，141份病料中有35份，占總數(shù)的24.8％。豬瘟是一種傳染性強(qiáng)、致病性高、危害最為嚴(yán)重的豬烈性傳染病之一，本次調(diào)查中CSFV的陽性率高達(dá)48.9％，其對(duì)豬高熱病的協(xié)同致病作用顯而易見。綜合本次調(diào)查結(jié)果，在豬高熱病病原尚未明確的情況

7、下，老的傳染病并未得到有效控制，如豬瘟；新的傳染病不斷被檢測出來，如PRRS和圓環(huán)病毒感染相關(guān)疾病(porcine cirvovirus disease，PCVD)。值得注意的是，豬捷申病毒和豬腸病毒感染，在我國豬群中的流行病學(xué)研究罕見報(bào)道，對(duì)2007年豬高熱病病例中兩病的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，PTV的陽性率占47.5％，PEVB陽性率占36.9％，流行情況是嚴(yán)重的。上述檢測結(jié)果足以說明我國豬高熱病的復(fù)雜性及防治的艱巨性。 本研

8、究試圖摸索一種復(fù)合熒光定量RT-PCR方法，用于CSFV野毒株與兔化弱毒疫苗株的鑒別診斷。通過對(duì)GenBank中公布CSFV野毒和弱毒疫苗株基因組序列的比較分析，在其5'端非編碼區(qū)設(shè)計(jì)了一對(duì)針對(duì)CSFV的通用引物和兩條分別針對(duì)CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株的特異性TaqMan探針，希望建立一種能區(qū)分CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株的敏感、特異、重復(fù)性好的復(fù)合熒光定量RT-PCR鑒別診斷方法，但所建立的方法并不能區(qū)分CSFV野毒和疫苗株的感