灰樹花液態(tài)發(fā)酵多糖富集研究.pdf

1、灰樹花(GrfolaFrondosa)是一種珍稀食藥兩用真菌，其在工廠快速液態(tài)培養(yǎng)過程中可生物合成具有生物活性且對人體無毒副作用的多糖?；覙浠ㄒ簯B(tài)發(fā)酵合成真菌多糖為保健食品的生產(chǎn)提供了新的途徑，并具有顯著的經(jīng)濟(jì)意義。本研究探索了灰樹花的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基組成及發(fā)酵條件，應(yīng)用正交法對灰樹花多糖提取和純化條件進(jìn)行了優(yōu)化，為進(jìn)一步開發(fā)灰樹花保健品提供了理論依據(jù)，并為液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)灰樹花菌絲多糖和綜合開發(fā)利用食用菌多糖資源奠定了基礎(chǔ)。 為測定

2、灰樹花菌絲體內(nèi)多糖的含量，研究了蒽酮比色法，利用蒽酮遇硫酸脫水生成的糠醛或其衍生物，可與蒽酮試劑發(fā)生縮合反應(yīng)，生成藍(lán)綠色化合物在610nm處有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關(guān)系，建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：y=0.112x+0.0154，R2=0.9982(x-610nm吸光度，y-葡萄糖濃度μg/mL)。 本研究對灰樹花液態(tài)培養(yǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行了單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)。選擇培養(yǎng)基中碳源和氮源因素，研究它們在各種水平下對灰樹花液態(tài)培

3、養(yǎng)(或稱發(fā)酵)富集多糖的影響。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，對碳源(葡萄糖+馬鈴薯)、氮源(麩皮)的濃度、無機(jī)鹽以及生長促進(jìn)劑(酵母膏)這四個(gè)因素分別選取四水平進(jìn)行L16(45)正交實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)指標(biāo)為菌絲干重和多糖量，得到優(yōu)化的培養(yǎng)基組成為：在1L培養(yǎng)基中含馬鈴薯300g，葡萄糖30g，麩皮35g，磷酸二氫鉀4g，硫酸鎂1g，酵母膏1.5g，VB11mg/1000mL。試驗(yàn)同時(shí)表明，碳源對菌絲干重的影響比較顯著，而無機(jī)鹽的含量及其比例對多糖含量有顯

4、著的影響。 對灰樹花液態(tài)培養(yǎng)的工藝條件進(jìn)行了單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，以得到的較優(yōu)培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，研究灰樹花液態(tài)培養(yǎng)和產(chǎn)生多糖的外界條件。對pH值、溫度、接種量、搖床轉(zhuǎn)速和搖瓶中裝液量，進(jìn)行了單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)。由于溫度和裝液量可變化程度很小，因而溫度確定為25℃和裝液量確定為10％搖瓶容積，故只選取pH值、接種量和搖床轉(zhuǎn)速三因素，各因素取三水平，進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)指標(biāo)為菌絲干重和多糖量。綜合考慮各指標(biāo)，得到較優(yōu)的工藝條

5、件是溫度25℃、pH值7.0、接種量10％培養(yǎng)基體積、搖床轉(zhuǎn)速120r/min、搖瓶裝液量10％。在優(yōu)化培養(yǎng)基上和培養(yǎng)條件下，灰樹花液態(tài)培養(yǎng)菌絲對多糖的富集含量為22.41％，菌絲干重為5.29g/L培養(yǎng)基。 通過對菌絲生長狀態(tài)、pH、菌絲干重、發(fā)酵液中殘?zhí)?、胞?nèi)多糖、胞外多糖含量及多糖總量這七個(gè)指標(biāo)對灰樹花多糖富集培養(yǎng)代謝特性進(jìn)行了描述，闡述了灰樹花液態(tài)培養(yǎng)及多糖產(chǎn)生的代謝特性，并分別建立了相關(guān)的特性曲線。采用正交實(shí)驗(yàn)法對灰樹