大鼠前庭內(nèi)側(cè)核膽堿能受體和γ-氨基丁酸受體介導(dǎo)的鈣離子熒光顯像及信息轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分乙酰膽堿對(duì)大鼠前庭內(nèi)側(cè)核鈣離子熒光強(qiáng)度的影響
　　 目的：探討大鼠前庭內(nèi)側(cè)核膽堿能受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子水平的變化。方法：應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡離子顯像技術(shù)對(duì)前庭內(nèi)側(cè)核離體腦片中被熒光顏料Fluo-3AM 標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。結(jié)果：大鼠前庭內(nèi)側(cè)核細(xì)胞對(duì)乙酰膽堿敏感，10-5～10-2 M 乙酰膽堿可以濃度依賴性的引起細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的增高，其中1mM是最大藥效濃度。膽堿能M 受體拮抗劑阿托

2、品(1μM)可以使1mM 乙酰膽堿引起的前庭內(nèi)側(cè)核神經(jīng)元鈣離子熒光的增強(qiáng)幅度降低55[％]，神經(jīng)元膽堿能N 受體的拮抗劑美加明(10μM)可以使1mM 乙酰膽堿引起的前庭內(nèi)側(cè)核神經(jīng)元鈣離子熒光的增強(qiáng)幅度降低49[％](n=5)。兩種拮抗劑之間對(duì)前庭內(nèi)側(cè)核鈣離子熒光的影響沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論：前庭內(nèi)側(cè)核膽堿能受體可以介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高，呈濃度依賴性，并且，毒蕈堿受體和煙堿受體均參與了此效應(yīng)。
　　 第二

3、部分大鼠前庭內(nèi)側(cè)核毒蕈堿受體介導(dǎo)的鈣離子熒光顯像研究
　　 目的：探討大鼠前庭內(nèi)側(cè)核中毒蕈堿受體對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的調(diào)控，及其調(diào)控機(jī)制。方法：應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡離子顯像技術(shù)技術(shù)對(duì)前庭內(nèi)側(cè)核離體腦片中被熒光顏料Fluo-3AM 標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。結(jié)果：5～100 μM的傳統(tǒng)的毒蕈堿受體的激動(dòng)劑Muscarine chloride 可以濃度依賴性的引起細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的增高，50 μM是最大藥效

4、濃度。該效應(yīng)可以被thapsigargin 明顯抑制(P<0.01)，而在無(wú)鈣腦脊液或存在EGTA的情況下，該效應(yīng)無(wú)明顯變化(P>0.05)。 并且，Muscarine chloride 引起的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度增高的效應(yīng)可以被毒蕈堿m1和m3 受體的特異性拮抗劑pirenzepine和 4-DAMP 明顯抑制(P<0.05)，而毒蕈堿m2和m4 受體的特異性拮抗劑methoctramine和tropicamide 無(wú)明顯抑制作用(P

5、>0.05)。結(jié)論：毒蕈堿受體通過(guò)前庭內(nèi)側(cè)核細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)對(duì)鈣離子的釋放介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的升高。并且，此效應(yīng)是通過(guò)毒蕈堿m1和m3 亞型受體來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　 第三部分大鼠前庭內(nèi)側(cè)核煙堿受體介導(dǎo)的鈣離子熒光顯像研究
　　 目的：探討大鼠前庭內(nèi)側(cè)核中煙堿受體對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的調(diào)控，及其調(diào)控機(jī)制。方法：應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡離子顯像技術(shù)對(duì)大鼠前庭內(nèi)側(cè)核離體腦片中被熒光顏料Fluo-3AM 標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變

6、化進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。結(jié)果：10～
　　 500 μM的傳統(tǒng)的煙堿受體的激動(dòng)劑nicotine 可以濃度依賴性的引起細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的增高，100 μM是最大藥效濃度。該效應(yīng)可以被EGTA和nifedipine 明顯抑制(P<0.01)，在無(wú)鈣人工腦脊液中，該效應(yīng)亦可被明顯抑制(P<0.01)。但是，mibefradil 及thapsigargin 對(duì)nicotine 引起的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度增高的效應(yīng)均無(wú)明顯抑制作用(P>0.

7、05)。此外，煙堿α 4 β2 亞型受體的特異性拮抗劑Dihydro-β-erythroidine 對(duì)nicotine引起的效應(yīng)有明顯的抑制作用(P<0.01)，而煙堿α 7 亞型受體的拮抗劑methyllycaconitine 則無(wú)明顯效果(P>0.05)。結(jié)論：煙堿受體可以介導(dǎo)前庭內(nèi)側(cè)核細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平呈濃度依賴性的升高，是通過(guò)細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流來(lái)實(shí)現(xiàn)的，至少有L型電壓門控鈣離子通道的開(kāi)放參與了此過(guò)程，并且，該效應(yīng)是通過(guò)煙堿α 4 β

8、2 亞型受體實(shí)現(xiàn)的，而非煙堿α 7 亞型受體。
　　 第四部分大鼠前庭內(nèi)側(cè)核γ-氨基丁酸受體介導(dǎo)的鈣離子熒光顯像研究
　　 目的：探討大鼠前庭內(nèi)側(cè)核中γ-氨基丁酸受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度變化，以及對(duì)膽堿能受體效應(yīng)的影響，并探討其調(diào)控機(jī)制。方法：應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡離子顯像技術(shù)對(duì)大鼠前庭內(nèi)側(cè)核離體腦片中被熒光顏料Fluo-3AM 標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。結(jié)果：5μM、20μM、100μM、500

9、μM GABA對(duì)前庭內(nèi)側(cè)核鈣離子熒光強(qiáng)度沒(méi)有顯著性影響 (P>0.05)，對(duì)毒蕈堿受體激動(dòng)劑muscarine chloride 引起的前庭內(nèi)側(cè)核鈣離子熒光強(qiáng)度變化也沒(méi)有顯著影響(P>0.05)，而對(duì)100μM nicotine 引起的前庭內(nèi)側(cè)核鈣離子熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)有明顯的抑制作用(P<0.05)，呈濃度依賴性，其中，100μM GABA 可以達(dá)到最大抑制效應(yīng)。GABAB 受體選擇性激動(dòng)劑baclofen 對(duì)50μM muscarine