淋巴細胞非神經(jīng)性膽堿能受體藥理學(xué)特征的研究.pdf

1、盡管膽堿受體是最早發(fā)現(xiàn)的受體，但隨著淋巴細胞非神經(jīng)性膽堿能系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)，讓我們對于傳統(tǒng)問題有了新的疑問。膽堿受體分為nAChRs和mAChRs兩大類，分別隸屬于與離子通道相偶聯(lián)和與G蛋白相偶聯(lián)的受體超級家族，神經(jīng)元的膽堿能受體存在交叉調(diào)節(jié)作用，免疫系統(tǒng)的nAChRs和mAChRs是否可以相互支配尚不清楚。同一受體在不同的組織器官分工各異，而AChRs的藥理學(xué)特征是否具有組織選擇性還沒有闡明。之前對于香煙、檳榔的危害主要集中在神經(jīng)系統(tǒng)上，但

2、其中所含的膽堿能激動劑煙堿和檳榔堿是否同時作用于淋巴細胞的AChRs還需要進一步研究；臨床常用的膽堿能藥物治療神經(jīng)性退行性疾病有效，而mAChRs在淋巴細胞的存在，是否會造成藥物靶向的不確定性，為人們提出一個新的研究課題。 淋巴細胞非神經(jīng)性膽堿能系統(tǒng)的研究工作僅開展了十幾年，AChRs對淋巴細胞的調(diào)節(jié)作用有待進一步深入研究?；谝陨弦苫螅覀冊O(shè)計了以下實驗進行探討研究。選用AChRs激動劑和拮抗劑對小鼠免疫系統(tǒng)的影響，研究淋巴細

3、胞非神經(jīng)性膽堿能系統(tǒng)中AChRs的藥理學(xué)特征及調(diào)節(jié)作用，揭示它參與功能的調(diào)節(jié)，以期能對上述問題給出滿意答案。 1．膽堿能激動劑和拮抗劑對脾淋巴細胞增殖反應(yīng)的影響 利用MTT比色法檢測AChRs激動劑和拮抗劑對刀豆蛋白A誘導(dǎo)的離體小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，激活淋巴細胞非神經(jīng)性mAChRs和nAChRs，可產(chǎn)生促進增殖和抑制增殖的雙向調(diào)節(jié)作用。其中α7-nAChRs參與介導(dǎo)煙堿和膽堿抑制增殖反應(yīng)。結(jié)果提示：乙酰

4、膽堿以自分泌或旁分泌的方式參與淋巴細胞的增殖反應(yīng)。傳統(tǒng)的膽堿能激動劑和拮抗劑也可以作用于淋巴細胞非神經(jīng)性膽堿能受體。 2．膽堿能激動劑和拮抗劑對免疫功能的影響 隨機：BALB／c小鼠分為7組，山莨菪堿組(2mg／kg)、東莨菪堿組(0.2mg／kg)、檳榔堿組(2mg／kg)、阿托品(1mgj／kg)+檳榔堿組、煙堿組(1.5mg／kg)和美加明(1mg／kg)+煙堿組。連續(xù)4周使用臨床劑量的藥物后，比較藥物組與對照組的

5、脾指數(shù)、血清溶血素、淋巴細胞轉(zhuǎn)化以及白細胞介素-2的變化。結(jié)果顯示，所使用的激動劑和拮抗劑對免疫功能都有一定的影響，檳榔堿和煙堿分別通過mAChRs和nAChRs介導(dǎo)反應(yīng)。這是本實驗的創(chuàng)新點，第一次提出非神經(jīng)性mAChRs參與檳榔堿對免疫系統(tǒng)的抑制作用。實驗結(jié)果提示：膽堿能藥物治療神經(jīng)退行性疾病的同時，也可能通過淋巴細胞非神經(jīng)性膽堿能受體而參與免疫功能的調(diào)節(jié)。 3．煙堿對淋巴細胞α 7-AChRs和M3-AChRs基因表達的調(diào)節(jié)

6、作用 正常BALB／c小鼠取出脾臟分離淋巴細胞，分別給予不同的藥物：(1)對照組(PBS代替藥物)；(2)刀豆蛋白A組(5μg／mL)；(3)煙堿組(10<'6>mol／L)；(4)刀豆蛋白A(5μg／mL)+煙堿組(10<'6>mol／L)。48h孵育后提取總RNA，RT-PCR方法合成dsDNA，比較藥物組和生理鹽水組之間淋巴細胞α7-AChR和M3-AChR基因表達的改變。結(jié)果顯示，四組均有α7受體及M3受體mRNA目的條

7、帶的表達(分別為213bp，278bp)。但生理鹽水組和藥物處理組的α 7受體及M3受體mRNA轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有明顯差異。 小鼠予以1.5 mg／kg的煙堿皮下注射，連續(xù)用藥2，3，4周后取脾，提取總RNA，RT-PCR方法合成dsDNA，比較煙堿組和生理鹽水組之間淋巴細胞a7-AChR和M3-AChR基因表達水平的改變。結(jié)果顯示，生理鹽水組和煙堿組均檢測到特異性a7受體、M3受體mRNA目的條帶的表達。煙堿組的a7和M3 mRNA