青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸褪黑素受體及5—羥色胺受體基因多態(tài)性初步研究.pdf

1、研究背景:脊柱側(cè)凸是脊柱偏離中線形成側(cè)方弧度并合并旋轉(zhuǎn)的三維畸形，其中其中80％是病因不明的特發(fā)性脊柱側(cè)凸(IS)，好發(fā)于青少年，是小兒骨骼肌肉系統(tǒng)中最常見的畸形之一。但到目前為止，所有關(guān)于AIS病因的研究尚無定論。目前對AIS病因的廣泛研究包含多種方面：從不同動(dòng)物模型到AIS病人的血及活體標(biāo)本的組織學(xué)、免疫熒光、遺傳及分子生物領(lǐng)域的研究，再到AIS患者的影像學(xué)、激素、神經(jīng)學(xué)研究等等。 有關(guān)AIS的內(nèi)分泌方面的病因假說研究比較廣

2、泛和深入。褪黑素、5-羥色胺、生長激素、鈣調(diào)蛋白等對于AIS的發(fā)生和發(fā)展的作用引起了諸多研究與討論。 褪黑素是一種由松果體分泌的激素，它的缺乏據(jù)推測可能干擾本體感覺系統(tǒng)(椎旁肌和脊柱)的正常對稱生長，從而形成脊柱側(cè)凸。摘除雞松果體可誘導(dǎo)出實(shí)驗(yàn)性脊柱側(cè)凸并且發(fā)現(xiàn)，在側(cè)凸的度數(shù)、椎體的旋轉(zhuǎn)方向、涉及椎體的數(shù)目、脊柱彎曲的發(fā)展上，松果體切除術(shù)后所引起的雞脊柱側(cè)凸畸形與人類特發(fā)性脊柱側(cè)凸極其相似。早期移植松果體或給予褪黑素可以預(yù)防脊柱側(cè)

3、凸的發(fā)生，在手術(shù)之后立即開始給予褪黑素治療，可成功地降低脊柱側(cè)凸地發(fā)病率，如果已經(jīng)存在脊柱側(cè)凸，則會(huì)減輕側(cè)凸的嚴(yán)重程度。在大量的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，人們發(fā)現(xiàn)褪黑素缺乏可以導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的紊亂，包括下丘腦、腦干、小腦和脊髓，可能會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致軀體的失衡，脊柱和椎旁肌的不對稱發(fā)育。近年來，已證明在雞的脊髓背側(cè)灰質(zhì)中，存在著大量的褪黑素結(jié)合的位點(diǎn)，這表明褪黑素對中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)脊柱生長發(fā)育方面具有重要作用。目前發(fā)現(xiàn)褪黑素受體廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)

4、中。學(xué)者們認(rèn)為，有關(guān)褪黑素受體在脊柱側(cè)凸動(dòng)物致病中的研究也許是特發(fā)性脊柱側(cè)凸病因?qū)W研究的突破點(diǎn)。 平衡反射的破壞可能是特發(fā)性脊柱側(cè)凸的發(fā)病機(jī)制之一。而5-HT對維持正常姿勢性肌肉張力和姿勢平衡上起重要作用。研究顯示小腦共濟(jì)失調(diào)患者的不平衡可通過長期給予5-HT得到部分緩解。而99％的脊柱側(cè)凸患者在姿勢反射上是異常的。這種異常可見于本體感受和光學(xué)反射系統(tǒng)中。他們認(rèn)為這種姿勢反射的破壞可能是脊柱側(cè)凸進(jìn)展的原因。給松果體摘除雞每天腹腔

5、內(nèi)注射5-羥色氨酸，結(jié)果表明，5-羥色胺缺乏可能破壞平衡肌張力和姿勢平衡，從而產(chǎn)生側(cè)彎，同時(shí)5-羥色胺在預(yù)防脊柱側(cè)凸發(fā)展上有重要治療作用。 目的:通過將特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者的褪黑素受體基因以及5-羥色胺受體基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與對照組進(jìn)行相互對比研究，觀察特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者褪黑素受體基因以及5-羥色胺受體基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的特點(diǎn)，探究基因多態(tài)性與特發(fā)性脊柱側(cè)凸的關(guān)系。同時(shí)結(jié)合患者臨床資料、流行病學(xué)調(diào)查統(tǒng)計(jì)資料，分析基因多態(tài)性

6、與臨床表型、與危險(xiǎn)因素以及基因與基因之間的相互關(guān)系，以進(jìn)一步探討基因在疾病發(fā)生中作用。 方法:結(jié)合AIS病因?qū)W中內(nèi)分泌假說與《家族性特發(fā)性脊柱側(cè)凸候選基因定位》研究結(jié)果，參照人類基因組計(jì)劃成果以及最新文獻(xiàn)報(bào)道，確立了9個(gè)候選基因，包括褪黑素、生長激素、鈣調(diào)蛋白、5-HT的受體基因。臨床收集25例特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者和25例性別年齡匹配的對照組患者(主要為外傷、感染者)的血液樣本，采用DNA提取、PCR基因擴(kuò)增以及基因測序的方法，統(tǒng)

7、計(jì)上述基因多態(tài)性位點(diǎn)情況，進(jìn)行對比研究，觀察各基因型的分布特點(diǎn)。完善實(shí)驗(yàn)對象的臨床資料和流行病學(xué)調(diào)查問卷，分析基因多態(tài)性與臨床表型、與危險(xiǎn)因素以及基因與基因之間的交互關(guān)系。 結(jié)論: 1、褪黑素受體基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(ID：rs8192552)在本實(shí)驗(yàn)中沒有多態(tài)性，與國外文獻(xiàn)報(bào)道有差別，可能在漢族人口中是保守的或雜合度較低。 2、脊柱側(cè)凸的患者存在畸形生長，發(fā)育高峰提前，在15歲前身高較同齡正常兒童要高，大于

8、15歲則沒有顯著差別。 3、坐姿不正有可能是促進(jìn)和加重側(cè)凸的環(huán)境因素，但也應(yīng)注意有無研究對象主觀傾向的可能。 4、褪黑素受體1B基因的多態(tài)性位點(diǎn)rs1562444其基因型雜合狀態(tài)“AG”頻率顯著低于對照組，可能在人群中有保護(hù)作用，換言之，有可能該位點(diǎn)的純合狀態(tài)基因型是脊柱側(cè)凸的易感基因。 5、本研究3個(gè)位點(diǎn)的基因型與臨床表型之間尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)。 6、褪黑素受體1B基因的多態(tài)性位點(diǎn)rs1562444純合狀態(tài)基