P物質(zhì)對(duì)大鼠睡眠-覺醒周期和情緒活動(dòng)的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、目的：應(yīng)用情緒行為活動(dòng)測定、腦立體定位、側(cè)腦室插管、微量注射、多導(dǎo)睡眠描記和免疫組織化學(xué)等方法，觀察P物質(zhì)和其拮抗劑(N-acetyl-L-tryptophan3,5-bis(trifluoromethyl)-benzylester，NALTBE)對(duì)大鼠睡眠-覺醒周期及其情緒活動(dòng)的影響。 方法：80只成年雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為睡眠記錄組和情緒行為組。睡眠記錄組大鼠經(jīng)水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉后

2、，將頭部固定于SN-2型腦立體定位儀上，暴露顱骨，雙氧水清潔顱骨表面，在冠狀縫前2mm及人字縫前1mm與顱骨中線兩側(cè)旁開1mm交叉點(diǎn)處分別安裝EEG電極，深度以穿透顱骨接觸到硬腦膜為度，用于記錄皮層腦電活動(dòng)；在雙側(cè)頸肌內(nèi)插入EMG電極用于記錄肌電活動(dòng)。EEG、EMG記錄電極引導(dǎo)線均連接到一個(gè)微型插座上。外徑為23gauge(0.6mm，OD)的不銹鋼引導(dǎo)管按Paxinos和Watson大鼠腦立體定位圖譜插入：右側(cè)腦室(AP：-0.8mm

3、，R：+1.5mm、H：-4mm)，引導(dǎo)管頂端距側(cè)腦室1mm，供側(cè)腦室內(nèi)微量注射藥物用。所有電極和引導(dǎo)管均用牙科水泥固定于大鼠的顱骨上。情緒行為組大鼠只埋入引導(dǎo)管，不安裝電極。 手術(shù)后，大鼠在記錄艙內(nèi)飼養(yǎng)1周以恢復(fù)和適應(yīng)環(huán)境。睡眠記錄組進(jìn)一步分為：PBS注射組(PBS，0.1M，PH=7.4，n=8)；SP1pmol組(n=8)；SP10pmol組(n=8)；SP100pmol組(n=8)；Anti-SP組(N-acetyl-L

4、-tryptophan3，5-bis(trifluoromethyl)-benzylester，NALTBE，100pmol，n=8)。SP及其拮抗劑均由PBS(0.1M，PH=7.4)生理緩沖液配制，注射容積均為1μl，經(jīng)注射導(dǎo)管注入側(cè)腦室。記錄速度5mm/s，振幅為50μV/cm，同步記錄腦電和肌電活動(dòng)。每次描記均09：00am開始，連續(xù)記錄4～6小時(shí)，用PC-30G軟件分析統(tǒng)計(jì)前4小時(shí)數(shù)據(jù)，計(jì)算覺醒次數(shù)(numberofwakef

5、ulness，nW)、慢波睡眠次數(shù)(numberofnon-rapideyemovementsleep，nNREMS)、快波睡眠次數(shù)(numberofrapideyemovementsleep，nREMS)、wake百分比、REMS(rapideyemovementsleep)百分比和NREMS(non-rapideyemovementsleep)百分比。最后一次記錄結(jié)束后將各組大鼠灌注固定，取腦，切片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法觀察大鼠腦中F

6、os蛋白的表達(dá)。 情緒行為組動(dòng)物分組方法和藥物注射方法與睡眠記錄組相同。不同藥物及劑量側(cè)腦室注射后觀察開野實(shí)驗(yàn)，其指標(biāo)包括：踩格數(shù)(crossing)、修飾次數(shù)(rearing)、排便次數(shù)(defecation)。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，觀察指標(biāo)為：進(jìn)入開放臂次數(shù)(openarmentry，OE)、進(jìn)入開放臂時(shí)間(openarmtime，OT)、進(jìn)入封閉臂次數(shù)(closedarmentry，CE)、進(jìn)入封閉臂時(shí)間(closedarmt

7、ime，CT)、向下探究次數(shù)(head-dipping)、封閉臂后腿直立次數(shù)(rearing)、排便次數(shù)(defecation)和伸展行為(strech-attendpostures)等相關(guān)參數(shù)。 結(jié)果：1.睡眠-覺醒變化：SP1pmol組、SP10pmol組、SP100pmol組分別比PBS注射組wake百分比減少(P＞0.05)，(P＜0.01)，(P＜0.01)；NREMS百分比分別增多(P＞0.05)，(P＜0.01)，

8、(P＜0.01)；而nW、nNREMS、nREMS、REMS百分比與PBS組均無差異(P＞0.05)。Anti-SP組與PBS組比較，wake百分比增加(P＜0.01)，NREMS百分比減少(P＜0.01)，REMS百分比減少(P＜0.05)，nWAKE增多(P＜0.05)。c-Fos蛋白免疫組化反應(yīng)，SP10pmol組大鼠腦片中腹外側(cè)視前區(qū)(ventrolateralpreopticarea，vLPO)Fos蛋白表達(dá)增加。 2

9、.情緒行為學(xué)測定(1)開野實(shí)驗(yàn)中，SP1pmol組、SP10pmol組、SP100pmol組大鼠分別表現(xiàn)為踩格數(shù)與修飾行為減少(P＞0.05)，(P＜0.01)，(P＜0.01)；而Anti-SP組大鼠踩格數(shù)明顯增加(P＜0.05)；各組大鼠的排便次數(shù)均無明顯差異。(2)高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，SP1pmol組、SP10pmol組、SP100pmol組大鼠均能增加進(jìn)入閉合臂的時(shí)間(P＜0.01)，減少理毛次數(shù)(P＜0.05)；SP10pmo

10、l組、SP100pmol組大鼠降低探究、垂直站立次數(shù)(P＜0.05)。Anti-SP組大鼠增加進(jìn)入開放臂的時(shí)間(P＜0.05)和次數(shù)，減少進(jìn)入閉合臂的時(shí)間(P＜0.01)與次數(shù)(P＜0.01)，而且能夠減少垂直站立，增加探究、伸展運(yùn)動(dòng)(P＜0.01)和理毛次數(shù)(P＜0.05)。各組大鼠的排便次數(shù)均無明顯差異。 結(jié)論：(1)P物質(zhì)是一種中樞性促眠物質(zhì)，其主要促進(jìn)慢波睡眠，而不影響異相睡眠(快動(dòng)眼睡眠)。(2)SP10pmol側(cè)腦室