高壓氧對失血性休克復蘇后炎癥反應的影響.pdf

1、目的:失血性休克是臨床常見的危重癥之一，許多因素包括缺血、缺氧、再灌注損傷參與了其病理過程?；钚匝鹾偷踝杂苫倪^度產(chǎn)生可觸發(fā)全身炎癥反應綜合癥，過度的全身性炎癥是失血性休克由可逆向不可逆轉(zhuǎn)化的重要原因之一，與休克的預后有明顯關(guān)系。因此，在失血性休克的早期，除進行積極的液體復蘇外，采取抗炎治療措施，阻斷或減少炎性介質(zhì)的生成和釋放，對于阻止失血性休克的病程發(fā)展有重要意義。高壓氧已經(jīng)被證明能減輕局部如骨胳肌[1，2]小腸[3]，皮瓣[4]，

2、肝[5]，以及一氧化碳中毒[6]后缺血再灌注損傷，有研究表明高壓氧可減輕脂多糖(LPS)[7]或酵母多糖(zymosan)[8]誘發(fā)感染性休克時的炎癥反應，國外有研究表明高壓氧可以減輕失血后肝臟腫瘤壞死因子-αmRNA(TNF-αmRNA)和血漿腫瘤壞死因子(TNF-α)水平以及肝白細胞介-6mRNA(IL-6mRNA)和血漿白細胞介素-6(IL-6)水平[9]。而對于失血性休克引起的全身炎癥反應甚至多器官功能障礙的高壓氧治療很少有報導

3、。本研究目的在建立大鼠失血性休克復蘇模型過程中應用高壓氧治療，以觀察高壓氧對失血性休克復蘇后炎癥反應的影響，同時探討其機制。 研究對象與方法:1.動物分組：Wistar大鼠隨機分為三組，每組24只大鼠。對照組：只進行手術(shù)操作，不放血誘導休克；休克組：誘導休克并進行常規(guī)補血、補液復蘇。復蘇后立即拔除插管、結(jié)扎血管、閉合傷口。高壓氧組：誘導休克并進行常規(guī)補血、補液復蘇，復蘇后立即拔除插管、結(jié)扎血管、閉合傷口。立即送入高壓氧艙，先以純

4、氧洗艙保持10分鐘內(nèi)壓力為0.2Mpa，氧濃度大于99.5％停留40分鐘。其間換氣10分鐘，減壓15分鐘出艙。送入氧艙約1小時。 2.失血性休克復蘇動物模型制備[10] Wistar大鼠，體重260-300g。中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供，雌雄不限，速眠新(0.4ml/kg)在25℃室溫下腹腔內(nèi)給藥麻醉，右股動脈插入套管針(Intima24GA)，連接多導生理記錄儀(POLYGRAPHRM6000，日本)，監(jiān)測血壓；左頸

5、靜脈插入套管針(Intima22GA)保留為復蘇通路，右頸動脈插入套管針(Intima22GA)，另一端連接肝素化玻璃注射器中，進行放血誘導休克，在5min內(nèi)使血壓下降并維持平均動脈壓30～35mmHg。通過輸、抽少量血維持低血壓狀態(tài)55min。低血壓60min后，用60％自體血量給大鼠進行復蘇5min，同時用兩倍血量的生理鹽水通過微量輸液泵進行補充55min。 3.指標檢測 麻醉后計0小時，2.5小時時誘導休克(對照組

6、不誘導，僅暴露并分離上述三處血管)，3.5小時時開始復蘇(對照組不復蘇)，4.5小時時復蘇結(jié)束，每組動物根據(jù)2.5小時、3.5小時、4.5小時、24小時，分成四個亞組(n=6)。大鼠分別按以上四個時點采血2毫升后處死，其中50μl加入5ml生理鹽水中離心去上清留取底部紅細胞。其余離心后取血漿。放免法檢測外周血腫瘤壞死因子(TNF-α)，TNF-α放射免疫藥盒購于北京科美東雅生物技術(shù)有限公司。比色法檢測誘生性一氧化氮合成酶(iNOS)，i

7、NOS測試盒購于南京建成生物工程研究所。羥胺法檢測大鼠紅細胞超氧化物歧化酶(SOD)。SOD測試盒購于南京建成生物工程研究所。 4.病理學檢查 三組動物在24小時后活殺取材，留取肝臟左葉、小腸、肺。石蠟包埋，切片，經(jīng)HE染色常規(guī)病理學光鏡檢查，24小時處死的大鼠所取得的腸[11]、肺[12]、肝[13]組織分別進行損傷評分。 5.統(tǒng)計學分析 用SPSS11.5ForWindows軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±

8、標準誤((-x)±s(-x))表示，采用單因素ANOVA(analysisofvariance)檢驗，獨立樣本間比較采用posthoc(SNK)檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果:1.血紅細胞SOD含量變化 2.5小時，3.5小時三組動物血紅細胞中SOD含量差異無統(tǒng)計學意義。4.5小時高壓氧組與休克組動物血紅細胞SOD含量差異無顯著性。對照組與高壓氧組和休克組相比差異具有顯著性(P＜0.05)。24小時高壓氧組

9、血紅細胞SOD值高于休克組，休克組血紅細胞SOD值低于假休克組，高壓氧組血紅細胞SOD值高于假休克組，差異均具有顯著性(P＜0.05)。 2.血漿iNOS含量變化 2.5小時，3.5小時三組動物血漿iNOS含量差異無統(tǒng)計學意義。4.5小時高壓氧組與休克組動物血漿iNOS含量差異無顯著性。對照組與高壓氧組和休克組相比差異具有顯著性(P＜0.05)。24小時高壓氧組血漿iN-OS值低于休克組，休克組血漿iNOS值高于對照組，

10、高壓氧組血漿iNOS值低于對照組，差異均具有顯著性(P＜0.05)。 3.血漿TNF-α含量變化 2.5小時，3.5小時三組動物血漿TNF-α含量差異無統(tǒng)計學意義。4.5小時高壓氧組與休克組動物血漿TNF-α含量差異無顯著性。對照組與高壓氧組和休克組相比差異具有顯著性(P＜0.05)。24小時高壓氧組血漿TNF-α值低于休克組，高壓氧組血漿TNF-α值低于對照組，休克組血漿TNF-α值高于對照組，差異均具有顯著性(P＜0

11、.05)。 4.病理損傷評分： 24小時處死的大鼠所取得的腸、肺、肝組織分別進行損傷評分，腸損傷按照Park’s腸損傷評分標準[11]進行評分，肺損傷按照Nishina肺損傷評分標準[12]進行評分，肝損傷評分按照Schimdt肝損傷評分標準[13]進行評分。24小時休克組大鼠腸、肝、肺病理損傷明顯，高壓氧顯著減輕了大鼠腸、肝、肺組織的水腫、出血、及炎性細胞浸潤。差異均具有顯著性(P＜0.05)。 結(jié)論:本研究中