手足口病腸道病毒71型分子分型和實驗室診斷特點的研究.pdf

1、手足口病(Hand-foot-mouth disense,HFMD)是由多種腸道病毒引起的常見傳染病,以嬰幼兒發(fā)病為主。其中以EV71及CoxA16型最為常見。近幾年來發(fā)病率有增加趨勢,從2008年3月份開始在我國安徽省阜陽市流行的手足口病的病原體,經(jīng)中國疾病預防控制中心實驗室檢查,結果確認是由腸道病毒71型(EV-71)所引起的。截至2008年5月7日,我國感染手足口病人數(shù)已經(jīng)達到16,778人,死亡28人。鑒于手足口病缺乏有效的實驗

2、室檢測診斷,臨床表現(xiàn)漸趨不典型,極易出現(xiàn)漏診、誤診,延誤治療,并發(fā)無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等,個別重癥患兒病情進展快,易發(fā)生死亡。尤其不典型病例的早期診斷,存在很大困難。為了解濟南地區(qū)的手足口病腸道病毒71型分子分型,研究更有效的實驗室檢測診斷指標,故對手足口病腸道病毒71型分子分型和實驗室診斷特點的進行研究,以滿足臨床診斷需要,降低患兒的致殘率和死亡率。
　　 本課題旨在通過我院住院的手足口病患兒

3、的糞便和腦脊液提取病毒RNA的方法,應用逆轉錄聚合酶鏈反應及聚合酶鏈反應技術檢測病毒,并對其進行VP1片段分析,研究其基因分型和分子進化,并對實驗室診斷特點進行研究。目前已取得如下結果:
　　 1、采用衛(wèi)生部推薦的引物序列,用北京天根RT-PER試劑盒進行擴增,可得到清晰的無雜帶的目的條帶。用于暴發(fā)期的篩檢是可行的。
　　 2、我室檢測的9個樣本(分別來自濟南、鄆城、平陰、河北清河、梁山、夏津、高唐、臨清、樂陵)在核苷酸

4、2366-2592區(qū)域.其同源性高達98.7-99.1％,僅有一個患者發(fā)生核苷酸的缺失。
　　 3、手足口病人并發(fā)與非并發(fā)腦炎的核苷酸在2366-2592區(qū)域無任何不同(VP3-YP1部分區(qū)域)
　　 4、用衛(wèi)生部推薦的EV71引物與我們自行設計的P2、P4引物的測序結果是一致的,證實濟南地區(qū)流行的EV71病毒株與阜陽地區(qū)的病毒株是同源的,但本研究中新設計的兩對引物擴增的片段分別為618bp和569bp,遠遠長于衛(wèi)生部推

5、薦的引物擴增的226bp的長度,對于研究病毒的分子分型和診斷具有明顯的優(yōu)勢。
　　 5、所測病人的EV71,均與安徽阜陽株在同一進化樹上,分子分型為C4亞型。
　　 6、手足口病患兒實驗室檢測發(fā)現(xiàn),多數(shù)表現(xiàn)為總T細胞減低,CD4細胞明顯減低,重癥病例、腦炎、腦膜炎和腦干腦炎病人CD4的降低更明顯.
　　 本課題研究表明:在疾病早期從患兒的糞便和腦脊液提取RNA進行RT-PCR檢測的方法,對兒童手足口病患兒腸道病毒

6、71型的病原學檢測其靈敏度高,特異性強,有較高的臨床應用價值。推廣后,有助于手足口病早期診斷、減少誤診、降低病死率和致殘率,提高患兒生存質量,提高人口素質,降低醫(yī)藥費用,減輕病員經(jīng)濟負擔。在手足口病的病原學檢測同時,觀察其病原流行分布情況,并為預防控制疾病發(fā)生發(fā)展提供依據(jù),可起到很重要的作用,因而具有良好的社會效益和深遠的社會意義。
　　 本研究經(jīng)山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技信息研究所檢索中心聯(lián)機檢索,國內(nèi)外有涉及EV71病毒缺失或變異文