氯碘羥喹的細(xì)胞分子作用機(jī)制研究.pdf

1、氯碘羥喹(Clioquinol，CQ)是一種喹啉類藥物，常用作抗真菌感染，細(xì)菌感染，皮脂溢出等疾病。但因有多種副作用，如視網(wǎng)膜病變，肌肉病，心臟病，外周神經(jīng)病變，在某些地區(qū)被禁止應(yīng)用。近年來有研究表明，氯碘羥喹對神經(jīng)退行性疾病和腫瘤具有治療作用，使其再次成為研究熱點(diǎn)。但在許多情況下，這些治療作用和副作用背后的分子機(jī)制尚不清楚。為了能安全用于臨床并盡量減輕副作用，對其分子機(jī)制進(jìn)行研究十分必要，本文對氯碘羥喹的細(xì)胞分子機(jī)制進(jìn)行了初步的研究。

2、
　　 通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)氯碘羥喹對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y，宮頸癌細(xì)胞HeLa，肝癌細(xì)胞SMMU7721以及正常肝細(xì)胞QSG7701的生長均有不同程度的抑制作用，但在小濃度長時(shí)間的作用下發(fā)現(xiàn)對正常細(xì)胞的毒性比較小。通過流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)氯碘羥喹能引起SH-SY5Y和SMMU7721細(xì)胞自吞噬，隨后吖啶橙染色檢測細(xì)胞內(nèi)酸性內(nèi)容物增多，加入自吞噬特異性抑制劑3-MA后，自吞噬被抑制，同時(shí)自吞噬標(biāo)志蛋白LC3的蛋白免疫印跡進(jìn)一步

3、證實(shí)了這一點(diǎn);細(xì)胞凋亡的研究發(fā)現(xiàn)氯碘羥喹能引起SMMU772細(xì)胞凋亡，但對SH-SY5Y細(xì)胞無作用，與Hochest33258染色熒光顯微鏡觀察所得結(jié)果一致;細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn)SH-SY5Y和SMMU7721在氯碘羥喹作用下，S期受到明顯阻滯，且硫胺素轉(zhuǎn)運(yùn)子競爭性抑制劑氨丙啉也同樣會引起者兩者S期阻滯，表明氯碘羥喹除了對細(xì)胞的兩種程序性細(xì)胞死亡途徑有影響，還可能與硫胺素的吸收，轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝相關(guān)。
　　 為了證實(shí)上述觀點(diǎn)，我們進(jìn)一步通

4、過高效液相色譜和熒光檢測相結(jié)合，檢測氯碘羥喹對細(xì)胞內(nèi)硫胺素和焦磷酸硫胺素含量的影響，發(fā)現(xiàn)氯碘羥喹明顯減少細(xì)胞內(nèi)硫胺素的含量，而焦磷酸硫胺素含量出現(xiàn)了增加。通過檢測以焦磷酸硫胺素為輔酶的轉(zhuǎn)酮醇酶酶活，表明氯碘羥喹顯著減弱該酶活性，而對轉(zhuǎn)酮醇酶的mRNA和蛋白表達(dá)水平的研究發(fā)現(xiàn)，雖然氯碘羥喹對轉(zhuǎn)酮醇酶的mRNA水平無明顯影響，但下調(diào)了其蛋白的表達(dá)。
　　 綜上所述，氯碘羥喹參與了硫胺素吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝表現(xiàn)硫胺素拮抗效應(yīng)，同時(shí)也可以引