氯原酸對白血病細(xì)胞的抑制作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、白血病是一類常見的嚴(yán)重威脅人類健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤.目前,化療和造血干細(xì)胞移植是治療白血病的主要手段,但是,通過化療只能取得短暫緩解,而異基因造血干細(xì)胞移植治療白血病5年無病生存率僅為35﹪-50﹪.此外,因造血干細(xì)胞供體限制,只有部分患者能進(jìn)行這一治療,而且還存在移植相關(guān)死亡和復(fù)發(fā)危險性.因此,尋找新的更有效抗白血病藥物仍然十分迫切和需要.氯原酸是一種提取自中草藥的物質(zhì),具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng),氯原酸鈉是一種氯原酸和鈉鹽的半合成小分子

2、化合物,近期有研究顯示氯原酸可以誘導(dǎo)包括Bcr-Abl陽性的慢性粒細(xì)胞白血病(CML)原代細(xì)胞在內(nèi)的Bcr-Abl陽性細(xì)胞的凋亡,而對Bcr-Abl陰性的細(xì)胞無明顯作用.另外,我們前期的研究工作已經(jīng)證實,鈣離子通道阻止劑小檗胺能選擇性誘導(dǎo)Ber.Abl陽性的人白血病細(xì)胞系K562和原代自血病細(xì)胞凋亡,而對正常骨髓造血細(xì)胞毒性很少.基于此,我們采用人白血病細(xì)胞系KGl、K562和Jurkat,以適當(dāng)濃度的氯原酸作用于各細(xì)胞系,觀察氯原酸對

3、各株白血病細(xì)胞的增殖抑制作用.并將氯原酸和小檗胺聯(lián)合作用于K562細(xì)胞,比較藥物聯(lián)合作用和各自單獨(dú)作用對細(xì)胞的增殖抑制作用. 對象與方法 一:、研究對象:人白血病細(xì)胞系:KGl、K562和Jurkat三株細(xì)胞系,其中KGl為急性原始粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系,K562為慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系,Jurkat為急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系(ALL).均為本實驗室常規(guī)培養(yǎng). 二、研究方法: 1.細(xì)胞接種:采用處于對數(shù)生長期

4、的細(xì)胞,按細(xì)胞密度8×10<'3>/孔分別加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中. 2.藥物作用: 每孔分別加入梯度濃度的藥物,Na-氯原酸和(或)小檗胺,不加藥物為陰性對照,每組設(shè)3個平行孔.37℃,5﹪CO<,2>,飽和濕度下培養(yǎng)48小時. 3.MTT作用:每孔加入20μlMTT,繼續(xù)培養(yǎng)4小時. 4.測吸光度:離心,棄上清,每孔加入200μl二甲基亞楓,水平搖床振蕩5分鐘,用全自動酶標(biāo)光度計在470nm處測吸光度.

5、 5.在計算機(jī)中使用Microsoft Office Excel計算抑制率及50﹪細(xì)胞生長抑制濃度,并以藥物濃度為橫坐標(biāo),活細(xì)胞數(shù)為縱坐標(biāo)作圖,觀察藥物對細(xì)胞增殖抑制的情況.結(jié)果-20℃保存的不同濃度的氯原酸鈉對K562細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用,其作用強(qiáng)度呈現(xiàn)濃度依賴性,48小時的50﹪細(xì)胞生長抑制濃度(IC50)值為24.210μg/ml,但是對KGl、Jurkat均無明顯得增殖抑制作用.4℃保存的不同濃度的氯原酸鈉對K562細(xì)胞具有

6、更強(qiáng)的增殖抑制作用,48小時的IC50值為13.177μg/ml,同時對Jurkat細(xì)胞也有較明顯的增殖抑制作用,48小時的IC50值為13.177 μg/ml,作用強(qiáng)度呈現(xiàn)濃度依賴性,但對KGl細(xì)胞仍無作用. 小檗胺單獨(dú)作用對K562細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用,其作用強(qiáng)度呈現(xiàn)濃度依賴性.48小時的IC50值為6.080μg/ml.13μg/ml(IC50)的氯原酸鈉與不同濃度的小檗胺聯(lián)合作用對K562細(xì)胞的增殖抑制作用略強(qiáng)于小檗

7、胺單獨(dú)作用于K562細(xì)胞.6μg/ml(IC50)的小檗胺與不同濃度的氯原酸鈉聯(lián)合作用對K562細(xì)胞的增殖抑制作用明顯強(qiáng)于氯原酸鈉單獨(dú)作用于K562細(xì)胞. 結(jié)論: 1.-20℃光保存的氯原酸鈉可以選擇性抑制bcr-abl陽性的CML細(xì)胞系K562細(xì)胞的增殖. 2.4℃保存的氯原酸鈉對bcr-abl陽性的CML細(xì)胞系K562的增殖抑制作用增強(qiáng),并且對bcr-abl陰性的Jurkat細(xì)胞亦具有增殖抑制作用.