燒傷膿毒癥小鼠早期Th1-Th2細胞ANXA1、GATA-3、T-bet表達的研究.pdf

1、目的：
　　觀察昆明小鼠在燙傷、膿毒癥及燙傷膿毒癥病理狀態(tài)下外周血Th1、Th2的變化，及其ANXA1、GATA-3、T-bet蛋白和mRNA的表達，探討ANXA1、GATA-3在燒傷膿毒癥中的免疫調(diào)控機制，尋找燒傷膿毒癥免疫抑制中的關(guān)鍵性分子，為發(fā)現(xiàn)藥物新靶點并有效防治膿毒癥提供研究基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.采用SPF級雄性昆明小鼠，體重35-40g，用隨機數(shù)字表法分為對照組、燙傷組、內(nèi)毒素注射組及燙傷膿毒癥組，制

2、造20％深Ⅱ度燙傷模型，分別于傷后12h、24h、48h和72h取小鼠外周血待檢測。
　　2.樣本分別以CD4+IFN-γ+及CD4+IL-4+T細胞標記Th1和Th2細胞，并觀察Th1細胞和Th2細胞的比例及Th1/Th2平衡的偏移狀況。再將Th1/Th2細胞設(shè)門進行ANXA1、GATA-3、T-bet的檢測。
　　3.RT-PCR法檢測外周血淋巴細胞中ANXA1、GATA-3、T-betmRNA的表達。
　　4.數(shù)

3、據(jù)錄入Excel表格進行統(tǒng)計處理，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件處理實驗數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1.流式細胞檢測
　　燙傷組小鼠Th1、Th2細胞比值在傷后12h和24h逐漸下降，48h和72h緩慢回升，而內(nèi)毒素注射組及燙傷膿毒癥組小鼠Th1細胞和Th2細胞比值持續(xù)下降，且Th1/Th2平衡向Th2方向偏移。與對照組比較差異顯著(P＜0.05)。
　　燙傷組小鼠傷后24h后外周血Th1和Th2細胞中ANXA1與GATA-3

4、的表達率低于對照組(P＜0.05)，并從24h起緩慢上升。T-bet的表達率在傷后12h和24h下調(diào)，傷后48h和72h又高于對照組。
　　內(nèi)毒素注射組Th1和Th2細胞中ANXA1和GATA-3未出現(xiàn)類似燙傷組的上升趨勢，傷后持續(xù)下調(diào)(P＜0.05)。而T-bet表達率傷后即開始出現(xiàn)明顯上升。
　　燙傷膿毒癥組Th1和Th2細胞中ANXA1、GATA-3、T-bet分子表達率在傷后全面持續(xù)下調(diào)(P＜0.05)。
　　

5、2.PT-PCR結(jié)果
　　燙傷組小鼠ANXA1、GATA-3和T-bet mRNA表達量傷后開始下降，并于傷后24小時降至最低，隨后表達上調(diào)，但ANXA1和GATA-3在其后各時相點仍低于對照組(P＜0.05)，而T-bet的表達量卻在其后兩個時相點明顯高于對照組。
　　內(nèi)毒素注射組小鼠傷后ANXA1和GATA-3 mRNA的表達量一直處于下降趨勢(P＜0.05)，而T-bet的表達量從12h起逐漸增多。
　　燙傷膿毒

6、癥組小鼠ANXA1、GATA-3和T-bet mRNA表達量從12h至72h逐漸下降(P＜0.05)。
　　3.相關(guān)性分析
　　采用Pearson相關(guān)性分析的方法，分別對流式細胞術(shù)檢測Th1、Th2細胞中ANXA1與GATA-3的表達率，以及PCR檢測外周血ANXA1與GATA-3 mRNA的表達量進行相關(guān)性分析，前者相關(guān)系數(shù)分別為0.747和0.787，后者相關(guān)系數(shù)為0.862，P＜0.05。
　　結(jié)論：
　　

7、1.燙傷組、內(nèi)毒素注射組及燙傷膿毒癥組小鼠Th1/Th2平衡向Th2方向偏移，燙傷膿毒癥組更為明顯。
　　2.燙傷組、內(nèi)毒素注射組及燙傷膿毒癥組小鼠Th1、Th2細胞ANXA1和GATA-3以及淋巴細胞ANXA1和GATA-3 mRNA表達下降，燙傷組于24h起逐步回升，但內(nèi)毒素注射組及燙傷膿毒癥組持續(xù)下調(diào)，且燙傷膿毒癥組更為明顯。T-bet及其mRNA在燙傷組及內(nèi)毒素注射組出現(xiàn)上調(diào)，而在燙傷膿毒癥組出現(xiàn)持續(xù)下調(diào)。
　　3.