慢性蕁麻疹患者轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3失衡表達(dá)的研究.pdf

1、目的：蕁麻疹是皮膚科常見(jiàn)的過(guò)敏性疾病，特征性表現(xiàn)為皮膚粘膜反復(fù)發(fā)生風(fēng)團(tuán)伴劇烈瘙癢。病程超過(guò)6-8周的為慢性蕁麻疹，臨床表現(xiàn)遷延難愈，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，甚至可發(fā)生喉頭水腫或休克危及患者生命。其具體發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，慢性蕁麻疹患者存在IFN-γ低表達(dá)，IL-4高表達(dá)，提示慢性蕁麻疹可能存在TH亞群失衡。T輔助細(xì)胞(Th細(xì)胞)可極化為T(mén)h1和Th2兩個(gè)功能性亞群。Th1分泌干擾素-γ (interferon-γ，I

2、FN-γ)、白細(xì)胞介素(inteleukine，IL)-12等細(xì)胞因子，主要參與細(xì)胞免疫。Th2分泌IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子，主要參與體液免疫。Th1/Th2極化是免疫應(yīng)答中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，生理狀態(tài)下維持著動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)Th1/Th2極化異?；蛉毕輹r(shí)可導(dǎo)致疾病。T細(xì)胞表達(dá)的T盒(T box expressedin T cells，T-bet)是2000年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)重要的Th1轉(zhuǎn)錄因子，選擇性在Th1譜系細(xì)胞中表達(dá)。T-bet不

3、僅可轉(zhuǎn)錄激活I(lǐng)FN-γ基因，誘導(dǎo)內(nèi)源性IFN-γ的生成和IFN-γ等位基因的染色質(zhì)重排，導(dǎo)致IFN-γ顯著表達(dá)，而且在促進(jìn)Th1分化同時(shí)抑制IL-4、IL-5等Th2型細(xì)胞因子生成。GATA連接蛋白-3(GATA binding protein-3，GATA-3)是鋅指結(jié)構(gòu)家族成員的轉(zhuǎn)錄因子之一，是Th2細(xì)胞特異的轉(zhuǎn)錄因子。不僅是所有關(guān)鍵性Th2型細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄所必需而且能極化已極化的Th1細(xì)胞。因此T-bet和GATA-3作為T(mén)h細(xì)胞分

4、化過(guò)程中作用相反的兩個(gè)特異性轉(zhuǎn)錄因子，是決定Th1/Th2分化的關(guān)鍵因素，替代了以往的細(xì)胞因子模式。本試驗(yàn)擬通過(guò)研究33例慢性蕁麻疹患者和20例健康對(duì)照者外周血PBMCs中T-bet和GATA-3表達(dá)水平及T-bet/GATA-3的比率變化對(duì)Th1/Th2分化失衡的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)一步從轉(zhuǎn)錄水平闡述慢性蕁麻疹發(fā)病機(jī)制。探討是否可以以，T-bet/GATA-3為靶點(diǎn)，從細(xì)胞分化的源頭上進(jìn)行干預(yù)，以促使Th1/Th2處于動(dòng)態(tài)平衡，為臨床治療慢性

5、蕁麻疹提供一個(gè)特異性更強(qiáng)，副作用更小的策略。 方法：患者組33例患者均來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門(mén)診?；颊呓M(慢性蕁麻疹患者組)入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均為典型的慢性蕁麻疹患者。(2)病程超過(guò)8周，每周發(fā)作不少于2次。(3)近2個(gè)月內(nèi)未用皮質(zhì)類(lèi)固醇激素或免疫抑制劑等影響全身免疫功能的藥物。1個(gè)月內(nèi)未服用息斯敏(阿司咪唑)，1周內(nèi)未使用抗組胺藥者。(4)年齡18-60歲者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)食物、藥物、感染等致敏，臨床上有明確

6、原因者。(2)人工性蕁麻疹、寒冷性蕁麻疹、膽堿能性蕁麻疹、日光性蕁麻疹、壓迫性蕁麻疹及血管性水腫者。(3)孕婦或哺乳婦。(4)同時(shí)患有紅斑狼瘡、天皰瘡、皮肌炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病以及腫瘤和其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾病及其他過(guò)敏性疾病、皮膚病的患者。對(duì)照組：來(lái)自本院健康醫(yī)護(hù)人員，共20例。均無(wú)過(guò)敏性疾患和自身免疫性疾病及家族史。經(jīng)t檢驗(yàn)，性別、年齡與病例組無(wú)顯著差異。 各抽取外周靜脈血6ml，各加乙二胺四乙酸(ethylenedia

7、mine-tetraacetic acid，EDTA)0.8 ml抗凝，按照密度梯度離心法分離PBMCs、提取RNA，再應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚合酶鏈反應(yīng)(RR-PCR)方法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞T-bet和GATA-3 mRNA表達(dá)強(qiáng)度。具體操作嚴(yán)格按照各試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。采用卡方檢驗(yàn)T-bet和GATA-3在慢性蕁麻疹患者組與在健康正常對(duì)照組中的表達(dá)頻率有無(wú)顯著性差異。由于T-bet和GATA-3mR

8、NA在慢性蕁麻疹患者組與在健康對(duì)照組中的表達(dá)強(qiáng)度的資料不滿足正態(tài)分布和方差齊性條件，因此采用兩個(gè)獨(dú)立樣本比較的Wilcoxon秩和檢驗(yàn)來(lái)分析其有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1．慢性蕁麻疹患者組及對(duì)照組PBMCs中T-bet mRNA表達(dá)強(qiáng)度的中位數(shù)分別為18.70％，28.55％，患者組較對(duì)照組低表達(dá)。兩組表達(dá)強(qiáng)度采用秩和檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)； 2．慢性蕁麻疹患者組及

9、對(duì)照組PBMCs中GATA-3mRNA表達(dá)強(qiáng)度的中位數(shù)分別為58.48％，22.47％，患者組明顯呈高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006)； 3．慢性蕁麻疹患者組及對(duì)照組患者組T-bet/GATA-3的比率較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.025)； 結(jié)論：1．慢性蕁麻疹患者T-bet mRNA的表達(dá)強(qiáng)度較對(duì)照組減弱，而GATA-3 mRNA的表達(dá)強(qiáng)度較對(duì)照組顯著增強(qiáng)；反映了慢性蕁麻疹患者存在Th1細(xì)胞亞群