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文檔簡介
1、目的:肝臟是機體新陳代謝及解毒功能得以完成的重要器官,過量氟進入體內必然對肝臟產(chǎn)生毒性作用。本課題建立氟中毒大鼠模型,從形態(tài)學、分子生物學方面研究氟對大鼠肝臟組織損傷和細胞凋亡的影響及可能作用機制,為氟中毒防治和毒性評價提供科學依據(jù)和思路。
方法:清潔級SD雄性大鼠48只,體重(90士10)g,隨機分為對照組、低氟組、中氟組和高氟組,每組12只,分別飲用含0,50,100,200mg/L氟化鈉的去離子水,建立氟中毒大鼠動物模型
2、。分別染氟90d和120d,用氟離子選擇電極法測尿中氟的含量,觀察動物臨床表現(xiàn)及肝組織病理變化,流式細胞術檢測肝細胞凋亡情況,單細胞凝膠電泳檢測肝細胞DNA損傷程度,免疫組化法檢測肝組織中Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平,熒光定量PCR檢測肝組織中Caspase-3、Caspase-9mRNA表達水平。
結果:
1.染氟90d、120d,低、中、高劑量染氟組大鼠尿氟均顯著高于對照組(p<0.05或p
3、<0.01);實驗組大鼠均出現(xiàn)不同程度的氟斑牙癥狀;表明已成功復制出慢性氟中毒大鼠模型。
2.不同染氟周期(90d、120d)的大鼠肝組織細胞呈現(xiàn)不同程度腫脹,以中央靜脈為中心的肝細胞脂肪變性為重,肝組織內出現(xiàn)多種灶狀病變。肝臟中央靜脈受損,胞漿內有較大的紅染顆?;虬麧{疏松,少數(shù)散在的肝細胞漿及胞核濃縮和單個細胞壞死,尤以120d的為重。
3.染氟90d、120d不同劑量染氟組細胞凋亡率與對照組相比,均顯著增高(p<
4、0.01),且高劑量組肝細胞凋亡率顯著高于低、中劑量組(p<0.01);染氟周期為120d與染氟周期為90d的各組大鼠肝細胞凋亡率相比,其細胞凋亡率均增高。
4.染氟90d、120d,各染氟組肝細胞拖尾率及遷移長度均高于相應的對照組,與對照組、低氟組、中氟組相比,高劑量染氟組的肝細胞拖尾率及遷移長度顯著增高(p<0.01),并且肝細胞拖尾率及拖尾長度隨染氟劑量的加大、染氟時間的延長而增大。
5.不同染氟時期對照組大鼠
5、肝組織著色較淺,Caspase-3、Caspase-9陽性表達呈棕黃色或棕褐色。對照組Caspase-3、Caspase-9蛋白表達穩(wěn)定,維持在極少量表達水平,中、高劑量染氟組著色明顯較對照組深,且120d的染氟組比90d的著色加深,并且隨著染氟劑量增加,各組陽性表達增強,Caspase-3、Caspase-9陽性表達的平均光密度值,高氟組較對照組、低氟組明顯增大(P<0.01)。
6.氟引起了caspase-3和caspas
6、e-9基因表達水平的改變,與對照組相比,低、中、高染氟組caspase-3基因表達量分別是對照組的0.3369倍、1.3733倍、2.2689倍;低、中、高染氟組caspase-9基因表達量分別是對照組的1.0278倍、3.0494倍、5.8495倍。
結論:
1.氟可誘導肝組織細胞凋亡,其凋亡率不僅與染氟劑量之間呈現(xiàn)劑量一效應關系,而且與染氟時間之間呈現(xiàn)時間一效應關系。
2.氟化物可導致大鼠肝細胞DNA損
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