壓力超負(fù)荷心肌肥大大鼠心肌細(xì)胞凋亡、ROS及ASK1表達(dá)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的和背景：心肌肥大是心肌細(xì)胞對(duì)高血壓、瓣膜病、急性心肌梗塞及先天性心臟病等常見(jiàn)臨床疾病的一種基本病理反應(yīng)，是影響心血管疾病發(fā)病率和病死率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素．高血壓引起心肌肥大時(shí)，心肌細(xì)胞表型變化，體積增大，心肌細(xì)胞內(nèi)收縮蛋白類型改變；心肌間質(zhì)細(xì)胞增殖，纖維組織增生，產(chǎn)生大量膠原和纖維素，使心肌結(jié)構(gòu)紊亂，順應(yīng)性減小，耗氧增加；同時(shí)心肌細(xì)胞凋亡增加，心肌整體收縮力下降，心肌收縮力不能發(fā)揮其應(yīng)有的射血效應(yīng)，從而誘發(fā)心功能不全。從分子水平上，

2、心肌肥大分為三個(gè)環(huán)節(jié)：細(xì)胞外肥大信號(hào)的刺激，細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和核內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄活化，最終誘發(fā)細(xì)胞發(fā)生肥大表型變化。許多研究證明，在壓力超負(fù)荷導(dǎo)致的心肌肥大反應(yīng)中，AngⅡ是重要的刺激因子，但AnglI導(dǎo)致心肌肥大反應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明。 絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinaseMAPK)是目前發(fā)現(xiàn)的最主要的一個(gè)生長(zhǎng)信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白，廣泛分布在細(xì)胞漿內(nèi)。MAPK及其介導(dǎo)的信號(hào)途徑在細(xì)胞生

3、長(zhǎng)、分化、增殖的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。MAPK家族可分為三大類：ERKs、JNrs和p38MAPKs。真核細(xì)胞中的MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路均以三級(jí)激酶級(jí)聯(lián)式形式激活，即MAPKKK-MAPKK-MAPK,因此探討MAPKKK在心肌肥大中的作用也是非常重要的。 凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ASKl)最近被確認(rèn)為氧敏感性MAPKKK，是JNrs和p38MAPK的上位激酶，對(duì)MAPK信號(hào)途徑是特異性的，能誘導(dǎo)JNrs和p38MAPK的持續(xù)激活，能被

4、TNF-a、活性氧(ROS)等激活而誘發(fā)凋亡，刺激膠原纖維增生。ASKl表達(dá)是否與高血壓心肌肥大有關(guān)國(guó)外只有少數(shù)而國(guó)內(nèi)尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。因此本實(shí)驗(yàn)采用腹主動(dòng)脈縮窄建立后負(fù)荷過(guò)載心肌肥大模型，研究ROS-ASKl這一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在后負(fù)荷過(guò)載心肌肥大中的作用，以及探討ATlR拮抗劑纈沙坦對(duì)心肌肥大的逆轉(zhuǎn)作用。 研究方法：采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立壓力超負(fù)荷心肌肥大大鼠模型，設(shè)立手術(shù)組(CAB組)、纈沙坦干預(yù)組(Val組，40mg/d．kg)

5、，另設(shè)假手術(shù)組(Sham組)，Val組于術(shù)后第一天灌胃給藥，持續(xù)6周后檢測(cè)：①平均動(dòng)脈壓(MAP)、左心室質(zhì)量指數(shù)(LVMI)；②苦味酸天狼猩紅染色心肌纖維化觀察及膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)測(cè)定，心肌細(xì)胞凋亡檢測(cè)(TUNLE法)；③心肌組織抗ROS單位測(cè)定(抗ROS單位檢測(cè)試劑盒，比色法)，免疫組化和免疫印跡法測(cè)定ASKl蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：①CAB組與Sham組比較，MAP、LVMI顯著升高(P<0．01)，Valsartan干預(yù)

6、6周后MAP、LVMI明顯降低；②腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后膠原纖維增多，CVF和APl增加(P<0．01)，Val組心肌組織病理變化明顯改善；③CAB組抗ROS活力單位、ASKl蛋白表達(dá)較Sham組和Val組顯著上調(diào)(P<0．01)，Val組與Sham組比較無(wú)顯著差異。ASKl蛋白表達(dá)和抗ROS活力單位存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論：ROS、ASKl途徑參與了壓力過(guò)載心肌肥大的形成過(guò)程，Valsartan能逆轉(zhuǎn)這一過(guò)程的進(jìn)展，其機(jī)制之一可能是通