全氟化碳對脂多糖致肺泡Ⅱ型上皮細胞鈉離子通道功能受損的保護作用.pdf

1、目的:
　　本研究旨在探討全氟化碳對脂多糖致肺泡II型上皮細胞鈉離子通道(ENaC)功能受損的保護作用。
　　方法:
　　(1)應用LPS(10μg/ml)干預A549細胞0-6h,采用qPCR檢測1L-1β、IL-6、TNF-α和ENaC-α的mRNA表達,采用western-blot檢測ENaC-α蛋白表達;建立肺損傷細胞模型;
　　(2)實驗分為對照組、LPS組、PFC組和 LPS/PFC組;
　　(

2、3)分組干預4h和6h后分別提取胞漿和胞膜蛋白,行western-blot檢測ENaC-α蛋白的表達;
　　(4)分組干預4h,應用膜片鉗全細胞記錄模式檢測跨膜電流變化后,標準細胞外液中加入ENaC抑制劑阿米洛利(10-5M)后再次檢測,計算加入阿米洛利鈉前后跨膜電流的變化及在各組間的差異;
　　(5)將A549細胞接種至snapwell小室,培養(yǎng)至完全融合形成單層上皮,按前述給予分組干預4h,應用尤斯灌流室系統(tǒng)檢測跨上皮短

3、路電流的變化后,單層上皮頂端側 K-H溶液中加入阿米洛利后再次檢測,計算加入阿米洛利前后短路電流的變化及在各組的差異。
　　結果:
　　(1)LPS增加A549細胞1L-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表達,4h達到最高峰,6h呈下降趨勢,但仍高于對照組,LPS抑制ENaC的mRNA和蛋白表達,于4h達峰值,6h呈上升趨勢,但仍低于對照組;
　　(2)干預后4h和6h,LPS抑制了胞膜ENaC-α蛋白的表達,PFC

4、可改善LPS導致的胞膜ENaC-α蛋白表達下調(diào);但無論4h還是6h,LPS和PFC對胞漿ENaC-α蛋白表達無明顯影響;
　　(3)干預4h后,LPS可顯著抑制經(jīng)ENaC通道的鈉離子跨膜鈉離子電流,而 PFC可改善LPS對跨膜鈉離子電流的抑制;
　　(4)干預4h后,LPS可顯著抑制A549融合單層上皮的阿米洛利敏感Isc,而PFC可改善LPS對阿米洛利敏感Isc的抑制;
　　結論:
　　LPS通過抑制肺泡II型