SLC20A1與Psma7相互作用研究.pdf

1、SLC20A1定位于2q13，由11個外顯子和10個內(nèi)含子組成，該基因編碼膜蛋白Pit1，Pit1是在大多數(shù)真核生物中表達的Ⅲ型鈉-磷協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白之一，在體內(nèi)無機磷向胞內(nèi)轉(zhuǎn)運過程中發(fā)揮重要作用。目前的觀點認為Pit1通過促進血管平滑肌細胞的磷吸收為血管鈣化所需的羥基磷灰石形成提供了條件，從而在鈣化過程中起到關鍵的作用。為了研究SLC20A1引起血管鈣化發(fā)生的分子機制。本論文通過截取SLC20A1胞內(nèi)親水Loop環(huán)的編碼序列構建釣餌載體，

2、并利用SMARTTM技術成功構建了小鼠胎腦cDNA文庫，文庫經(jīng)過鑒定后，完整性和代表性均符合實驗要求。隨后利用酵母雙雜交系統(tǒng)從構建的文庫中篩選可能與Pit1相互作用的蛋白質(zhì)，結果篩選到了一個新的與其相互作用的蛋白Psma7。
　　Psma7是20S蛋白酶體核心復合物的α4亞基。20S蛋白酶體與19S蛋白酶體一起組成26S蛋白酶體復合物，在體內(nèi)參與泛素化-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）中而起作用。
　　為了進一步探究Pit1與Psma

3、7相互作用引起血管鈣化的可能機制，研究了兩者之間是否在體內(nèi)環(huán)境下存在相互作用。成功構建了帶有GFP標簽的Psma7表達載體，以及帶有Flag標簽的Pit1表達載體，通過Co-IP實驗，驗證了Pit1與Psma7的相互作用。并進一步利用免疫熒光共定位實驗證明了Psma7與Pit1在細胞內(nèi)是共定位的。
　　本次研究首次發(fā)現(xiàn)了與Pit1相互作用的一個新的蛋白Psma7，并且初步證明了它們在物理上和功能上確實存在相互作用。這為解釋Pit1