B細胞非霍奇金淋巴瘤候選腫瘤干細胞群SP細胞的免疫表型研究.pdf

1、本文主要從以下兩個部分展開論述：
　　第一部分 淋巴瘤細胞系側(cè)群細胞的驗證
　　目的：通過檢測淋巴瘤細胞系側(cè)群細胞（Side Population，SP）的方法研究淋巴瘤細胞系中是否存在腫瘤干細胞候選細胞并驗證其干細胞特性。
　　方法：選用對數(shù)生長期的彌漫大B細胞淋巴瘤細胞，提取為單個細胞后分為實驗組和對照組，對照組加入維拉帕米100μmol，30min后兩組均染Hoechst染料90min后上機檢測，用流式儀紫外激發(fā)

2、光檢測SP細胞。
　　結(jié)果：人彌漫大B淋巴瘤OCI-Ly8細胞系（人結(jié)腸癌DLD-1細胞系作為對照）均存在SP細胞，含量分別為2.4％和0.6％。人彌漫大B淋巴瘤OCI-Ly8細胞系克隆集落形成實驗證明了SP細胞具有更強的克隆形成能力。
　　結(jié)論：人彌漫大B淋巴瘤OCI-Ly8細胞系存在SP細胞，且SP細胞具有干細胞特性。
　　第二部分 原代淋巴瘤側(cè)群細胞的鑒定及其免疫表型分析
　　目的：分析原代淋巴瘤標(biāo)本中SP

3、細胞的比例及免疫表型，以及探索非霍奇金淋巴瘤患者的SP水平與臨床疾病的關(guān)系。
　　方法：選取非霍奇金淋巴瘤患者的骨髓及淋巴結(jié)標(biāo)本，提取單細胞后用多色流式儀檢測其SP區(qū)域，SP區(qū)域的細胞可根據(jù)Hoechst染料熒光強度在前向角散射(forward scatter，F(xiàn)SC)和側(cè)向角散射(side scatter，SSC)圖上分為上下兩群，可定義為SPlow和SPhigh兩個亞群，并用流式熒光抗體分析其細胞表面標(biāo)記。
　　結(jié)果：統(tǒng)

4、計10例原代淋巴瘤標(biāo)本及4位正常對照組SP百分比平均值為3.6％和8.2％。10位病人標(biāo)本的SPlow百分比平均值為3.54％；SPhigh百分比平均值為2.4％；non-SP百分比平均值為20.72％。病人SPlow免疫表型為CD19dimCD20-、SPhigh免疫表型為CD19-CD20-、non-SP的免疫表型為CD19+CD20+。
　　結(jié)論：淋巴瘤患者原代標(biāo)本中可以檢測到SP細胞，平均值為8.2％，高于正常對照。SP細