B細胞型非霍奇金淋巴瘤細胞株中CHFR基因表達及甲基化的研究.pdf

1、B細胞型非霍奇金淋巴瘤細胞株中CHFR基因表達及甲基化的研究摘要目的檢測B細胞型非霍奇金淋巴瘤Raji細胞中CHFR基因的表達和甲基化狀態(tài)，以及去甲基化試劑5氮雜一2’一脫氧胞苷對淋巴瘤細胞增殖和凋亡的影響，為臨床應用去甲基化藥物靶向治療非霍奇金淋巴瘤提供理論和實驗依據(jù)。方法①體外培養(yǎng)非霍奇金淋巴瘤細胞株(Raji細胞)，分別以1t2mol／L，4umol／L，7pmol／L，10umol／L去甲基化試劑5一氮雜一2’一脫氧胞苷(5Az

2、a2’一de)處理Raji細胞；②采用RTPCR方法檢測反應性增生淋巴結組織及非霍奇金淋巴瘤細胞株Raji細胞中CHFR基因的表達；③采用RTPCR方法檢測分別經112mol／L，412mol／L，7umol／L，1011mol／L的5Aza一2’一de處理后的Raji細胞中CHFR基因的表達；④MS—PCR(甲基化特異性PCR)方法檢測Raji細胞株及經1012mol／L去甲基化試劑處理后CHFR基因的甲基化狀態(tài)；@ccI(8檢測分別

3、經112mol／L，412mol／L，7umol／L，10lamol／L去甲基化試劑處理后Raji細胞的增殖抑制率；⑥流式細胞術檢測分別經分別經1umol／L，411mol／L，712mol／L，1011mol／L去甲基化試劑處理后的Raji細胞凋亡率。結果①經RTPCR檢測發(fā)現(xiàn)反應性增生淋巴結組織中CHFR基因的相對表達量為0898007，Raji細胞中CHFR的相對表達量為O1214O013，提示Raji細胞中CHFR相對表達量明顯

4、低于正常細胞，差異有統(tǒng)計學意義(p005)。②RTPCR檢測經不同濃度5Aza一2dc處理后CHFR基因相對表達量分別為01740012，02380015，031840019，038940009，經5Aza一2’一dc處理后表達量上升，差異有統(tǒng)計學意義(p005)；③Raji細胞中CHFR基因啟動子可見甲基化與非甲基化條帶共存的狀態(tài)，即部分甲基化，經5Aza一2’一dc處理后甲基化條帶變暗，非甲基化條帶亮度增加；④分別以112mol／L

5、，4umol／L，7umol／L，1012mol／L的去甲基化試5一Aza一2’一dc處理細胞后，CCK一8檢測細胞的抑制率分別為(26o40)％，(88o96)％，(124o61)％，(16211)％，隨5Aza2’dc濃度的增高，細胞抑制率增加，差異有統(tǒng)計學意義(p005)。⑤流式細胞術檢測未經5Aza一2j—dc處理的Raji細胞早期凋亡率為(172士01)％，經1|lmol／L，4pmol／L，7lamol／L，1012mol／

6、L5Aza2’de處理細胞后，細胞的凋亡率分別為(3864O35)％，(6274O4)％，(9574033)％，(155046)％，細胞凋亡率增加，且在一定范圍內凋亡率隨5Aza一2’一dc濃度的增高而增加，差異有統(tǒng)計學意義(p005)。TheExpressionandMehtyrlafionofCHFRinBcellNon—Hodgkin’sLymphomaCellsAbtractObjective：ToinvestigatemRNA

7、expressionlevelofCHFRgeneinB—cellNon—Hodgkin’sLymphomaCells，theeffectofCHFRgenemathylationandmethylationinhibitoronRaftcellsproliferationandapoptosis，whichcanprovideatheoreticalandexperimentalfoundationforLymphomaclinica

8、ltherapyMethods：④ThehumanBurkitt’SRajilymphomacellswerecultivatedinvitroRajicellsweretreated麗th1，4，7and10gmol／Lofmethylationinhibitor5一Aza一2’deoxycytidine(5Aza一2dC)；②TheCHFRgeneexpressionleveloflymphnodeofpatientswithnon

9、neoplasticdiseasesandRajicellswasdetectedbyRTPCR⑧TheCHFRgeneexpressionlevelaftertreatedwith1，4，7and10pmol／Lof5Aza一2’一dCwasdetectedbyRT—PCR；@MethylationofCHFRgeneofRajicellsandtreatedwith109mol／Lof5一Aza2dCwasanalyzedbyMS—

10、PCR；⑤ThecellsproliferationofRajicellstreatedwithdifferentconcentrationsof5Aza2dCwereanalyzedbyCCKassay⑥TheapoptosisofRajicellswasanalyzedbyflowcytometryResults：@TheCHFRmRNArelativeexpressionoflymphnodeandRaftcellswere089

11、8士007，0121士0013CHFRgenehadlow—expressioninRajicellsthedifferencewasstatisticallysignificant(P005)；②TherelativeexpressionofCHFRmRNAaftertreatedby5Aza2’dCatconcentrationsof1，4，7andl09mol／Lwere0174士0012，023840015，031840019，

12、0389士0009，respectively，thedifferencewasstatisticallysignificant(P005)5Aza一2dCCanup—regulatetheexpressionofCHFRmRNAbydemethylation(9InuntreatedRaftcellsCHFRgenewaspartlymethylationandmathylationstatewasdecreasedaftertreat

13、edwith5Aza一2dC@ThegrowthinhibitionrateofRajicellsaftertreatedwith5Aza2dCwere(26士040)％，(88096)％，(1244061)％，(162士11)％，respectivelyThegrowthofRajicellswasinhibitedWiththeelevationofthedrugsconcentration，theinhibitionrateinc

14、reasedThedifferencewasstatisticallysignificant(P005)@TheearlyapoptosisrateofRajicellsinthecontrolgroupwas(172士01)％Thesecellswhichweretreated謝th5Aza2dCwere(386035)％，(62704)％，(957士033)％，(155士046)％Withtheincreasingconcentra