COX-2 shRNA對HSC甘油三酯、膽固醇、維生素A代謝的影響.pdf

1、目的:
　　研究COX-2在活化的肝星狀細(xì)胞中的表達(dá),探討COX-2與脂代謝關(guān)鍵基因ACC、HMGCR、CPT1a在活化的肝星狀細(xì)胞中作用的相互關(guān)系。構(gòu)建 COX-2的shRNA,檢測其在大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6中對COX-2基因表達(dá)的抑制作用,以及敲低COX-2的表達(dá)后,觀察COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a的表達(dá)變化,以及細(xì)胞內(nèi)的甘油三脂、膽固醇、維生素A的含量變化,并進(jìn)一步探討COX-2在肝纖維化的作用機制。

2、>　　方法:
　　取肝星狀細(xì)胞HSC-T6為研究對象。實驗分為6組:第一組為shRNA序列1組;第二組為shRNA序列2組;第三組為shRNA序列3組;第四組為陰性對照組;第五組尼美舒利藥物組;第六組為空載體組。第一組至第第三組為活化的肝星狀細(xì)胞中加入靶向COX-2基因的shRNA最佳劑量分別轉(zhuǎn)染24小時、48小時、72小時。用 RT-PCR法檢測每組肝星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)染后 COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a水平的mRNA表達(dá);

3、高效液相色譜法(HPLC)檢測每組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯、膽固醇、維生素A的含量,從而確定靶向COX-2基因的shRNA沉默COX-2基因后對肝星狀細(xì)胞脂代謝影響的時效關(guān)系。實驗數(shù)據(jù)以±s表示,用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,以P﹤0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　加入靶向COX-2基因的shRNA最佳劑量分別轉(zhuǎn)染24小時、48小時、72小時,結(jié)果顯示:靶向COX-2基因的shRNA可有效敲低COX-2mR

4、NA的表達(dá),同時呈時間依賴性的減少HMGCR、CPT1的mRNA表達(dá)、增加ACC的mRNA表達(dá)。選擇性COX-2抑制劑有同樣的效果,但是轉(zhuǎn)染組與藥物組比較差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。HPLC結(jié)果顯示:細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量、維生素A呈時間依賴性增加;膽固醇呈時間依賴性減少。
　　結(jié)論:
　　1、COX-2可促進(jìn)HMGCR、CPT1的表達(dá),抑制ACC的表達(dá)。
　　2、COX-2的表達(dá)被沉默后,可使HSC脂滴內(nèi)的脂肪含量增加,HSC