外源性膽固醇對鵝肝細胞中甘油三酯、總膽固醇含量及相關基因的表達調控研究.pdf

1、膽固醇代謝與肝脂肪變性密切相關，目前很少有關于外源性膽固醇對細胞水平的肝內膽固醇及脂肪酸代謝影響及其機制的報道。本實驗為了研究膽固醇在肝細胞脂肪變性過程中的作用，以15日齡四川白鵝和朗德鵝原代肝細胞為材料，檢測了外源性膽固醇對肝細胞內甘油三酯(TG)，總膽固醇(TC)含量的影響，并采用實時熒光定量PCR檢測膽固醇與脂肪酸代謝過程中的關鍵調控基因FAS、HMGR、SREBP-1/2mRNA表達的變化情況，獲得以下主要結果： (1)

2、采用Selgon二步灌流法能夠很好的分離純化鵝肝細胞，平均每只鵝能提取鵝肝細胞6×107細胞，細胞活率達到90％以上。 (2)10～30μg/ml膽固醇均能顯著促進兩個品種鵝肝細胞中TG合成(P<0.05)。其中20μg/ml的膽固醇促進作用最為明顯；隨膽固醇培養(yǎng)時間的增加，細胞中TG含量也逐漸增加，其中48h達到最高，與培養(yǎng)0、12、24h后細胞中TG相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)

3、；而各處理組中朗德鵝TG含量顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (3)10～30μg/ml顯著增加了鵝肝細胞中的SREBP-1mRNA的水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇促進作用最為明顯；同時隨著培養(yǎng)時間的延長，SREBP-1的表達量呈現(xiàn)上升趨勢，其中48h表達量達到最高，與培養(yǎng)0、12、24h的表達量相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間比較，朗德鵝SRE

4、BP-1mRNA表達量顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (4)10～30μg/ml膽固醇對生脂關鍵基因FAS的表達有促進作用，顯著增加了FASmRNA的表達水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇促進效果最為顯著。隨著培養(yǎng)時間的延長，F(xiàn)AS的表達量呈現(xiàn)上升趨勢，48h表達量達到最高，與培養(yǎng)0、12、2h的表達量相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間比較，朗德鵝F

5、ASmRNA表達量顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (5)不同濃度膽固醇處理后，兩品種鵝肝細胞中TC含量變化均不顯著(P>0.05)；隨膽固醇處理時間的增加，細胞中TC含量開始呈上升趨勢，24h達到最高，與對照組相比，差異顯著(P<0.05)；24h后，TC含量開始下降，72h后，與對照相比，差異不顯著(P>0.05)而兩品種鵝各處理組之間相比，朗德鵝肝細胞中TC含量要顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (6)10～3

6、0μg/ml膽固醇顯著降低了兩個品種鵝肝細胞中的SREBP-2mRNA的水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇降低效果最為明顯；隨培養(yǎng)時間的延長，SREBP-2的表達量呈下降趨勢，其中培養(yǎng)48h的表達量最低。與培養(yǎng)0、12、24h的表達量相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間比較，SREBP-2mRNA表達量間沒有顯著差異(P>0.05)。 (7)10～30μg

7、/ml膽固醇顯著降低了兩鵝肝細胞中的HMGRmRNA的水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇降低效果最為明顯；隨培養(yǎng)時間的延長，HMGR的表達量呈下降趨勢，其中培養(yǎng)48h的表達量最低。與培養(yǎng)0、12、24h的表達量相比，差異顯著(P<0.05)；與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間HMGRmRNA表達量沒有顯著差異(P>0.05)。 (8)兩品種鵝肝細胞中的TG含量與膽固醇濃度存在一定正相關

8、，但相關不顯著(P>0.05)，而與膽固醇處理時間存在顯著正相關(P<0.05)；SREBP-1mRNA表達量與膽固醇濃度存在一定正相關，但相關不顯著(P>0.05)，而與膽固醇處理時間存在顯著正相關；FASmRNA表達量與膽固醇濃度及處理時間均存在顯著正相關(P<0.05)；FASmRNA表達量與SREBP-1mRNA表達量間存在極顯著正相關(P<0.01)。 (9)兩品種鵝肝細胞中TC含量與膽固醇濃度及處理時間均不存在顯著性