COX-2shRNA對肝星狀細(xì)胞COX-2、Leptin基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　研究COX-2shRNA對大鼠肝星狀細(xì)胞COX-2、Leptin基因表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1.將三條COX-2shRNA分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染大鼠HSC,利用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率。
　　2.分別在轉(zhuǎn)染HSC的24h、48h、72h后提取RNA,用RT-PCR法檢測肝星狀細(xì)胞中COX-2、Leptin基因表達(dá)。
　　3.用western檢測被轉(zhuǎn)染HSC的48h后cox-2的蛋白表達(dá)水平。
　

2、　4. COX-2shRNA1轉(zhuǎn)染肝星狀細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測肝星狀細(xì)胞中COX-2基因被沉默后,Leptin蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.COX-2 shRNA三條序列轉(zhuǎn)染HSC24h、48h、72h后, HSC內(nèi)均有熒光表達(dá)。
　　2.RT-PCR結(jié)果顯示:三條COX-2shRNA均能抑制大鼠肝星狀細(xì)胞COX-2、Leptin基因表達(dá),以COX-2shRNA-1在72h的抑制效果最佳。
　　3.Weste

3、rn法證實(shí)三條COX-2shRNA均能抑制大鼠肝星狀細(xì)胞COX-2蛋白質(zhì)表達(dá),以COX-2shRNA-1的抑制效果最佳。
　　4.免疫細(xì)胞化學(xué)法證實(shí)COX-2shRNA-1可以沉默COX-2基因,抑制Leptin蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.靶向COX-2 shRNA能夠沉默大鼠HSCs中COX-2的表達(dá),以COX-2 shRNA序列1組沉默效果最好。
　　2.靶向COX-2 shRNA能夠抑制大鼠HSCs C